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    高效率转染人淋巴瘤细胞的操作方法

    发布时间: 2021-11-11  点击次数: 252次

    转染条件:

    培养板:6孔板

    转染试剂用量:10ul

    核酸用量:电讯

    转染试剂:AD600150,Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂

    转染时间:48小时

    血清:Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清

    细胞冻存:CE70100T无血清细胞冻存液

    高效率转染效果图如下:

    高效率转染人淋巴瘤细胞的操作方法

    高效率转染人淋巴瘤细胞的操作方法

    操作步骤

    提前 1 天接种细胞:细胞汇合度在 60-80%左右,再进行转染。

    核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混匀,室温静 止 10-15 分钟。

    在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基 里面可以含有血清。

    细胞换液:转染 24 小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。

    分析结果:质粒 DNA 转染 48-72 小时后荧光检测转染效率,48-96 小时检测 mRNA 或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后 24-48 小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA 转染后 9 小时荧光检测转染效率,48-72 小时检测 mRNA 或蛋白表达。

     

    注意事项:

    1、质粒 DNA 必须溶解于无菌双蒸水或超纯水,但不能溶解于提取试剂盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的质粒转染效率会下降 80%左右,甚至会转染失败。

    2、质粒必须去除内毒素,内毒素对细胞将产生很大的细胞毒性,会导致转染效率下降 70%-80%左 右,甚至导致转染失败(推荐使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去内毒素质粒提取试剂盒)。 

    3、复合物的制备过程中是绝对不能用其他任何试剂对核酸或转染试剂进行稀释,只需将核酸和转染 试剂两者按 1:1 比例直接混合,如果进行了稀释会导致转染失。 

    4、转染试剂与核酸混匀后用移液器吹打 10-15 次,室温孵育 10-15 分钟后即可加入细胞培养板。 

    5、转染 24 小时后进行正常换液,不能像 Lipo2000 一样转染 4-6 小时后换液。 

    6、原代细胞、免疫细胞转染时,细胞基础培养基里面不能含有双抗培养基。


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