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    从海胆和沙币等无脊椎动物系统获取配子的实验方法

    发布时间: 2021-11-16  点击次数: 209次

    材料与仪器

    海胆和沙币
    KCl 溶液 3-氨基-1 2 4-三唑
    巴斯德吸管 Nytex 滤器

    步骤

    一、海胆和沙币体腔内注射 0.5 mol/L 的 KCl

    1. 制备 0.5 mol/L 的 KCl 溶液。

    2. 用海水冲洗一下动物以去掉颗粒物质。

    3. 用一个 23~26 号的针头向动物的口缘空腔内注射多达 500 μl 或 100 μl KCl。

    4. 用巴斯德吸管收集“干"(米青)子,并储存于置于冰上的小塑料管中。‘

    5. 将雌性动物在一杯海水中翻过来收集卵子。

    6. 用 Nytex 滤器洗卵子,以去掉颗粒,并使卵子吸附到滤膜上。

    7. 通过将水吸走或小心倒掉,再加入洁净的海水将卵子洗几遍。

    二、海胆的电刺激

    1. 将海胆反口面向上放在纸巾上。

    2. 将两个电极一边一个放在接近生殖管的贝壳部位,配子就会从生殖孔中释放出来。

    3. 如果需要,在生殖管周围的几个部位通以电流。

    4. 开始收集卵子和(米青)子,并受精。

    三、海胆和沙币卵的受精

    1. 制备稀释的(米青)子悬液。

    2. 向洗过的卵中加入(米青)子

    四、受精膜的去除

    1. 获取卵子。

    2. 将卵子重悬于含有 1mmol/L 3-氨基-1,2,4-三唑的海水中。

    3. 受精。

    4. 当受精膜出现后,将卵子倒入直径比卵子小几微米的 Nytex 网中。


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