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    大鼠主动脉内皮细胞培养实验——贴块法

    发布时间: 2021-12-04  点击次数: 309次

    材料与仪器

    雄性Wistar大鼠
    DMEM 胎牛血清 内皮细胞生长因子 肝素钠 青链霉素 明胶 胰蛋白酶 PBS D-Hanks’液
    手术器械 眼科剪 眼科镊 培养皿 手术刀 培养瓶 CO2培养箱

    步骤


    1. 颈椎脱臼处死大鼠,将整个大鼠浸泡于75%乙醇中消毒约1  min。在无菌状态下,逐层剪开胸腔,分离取出主动脉,放含无菌 D-Hanks’液培养皿中。


    2. 用眼科剪、镊尽量去除血管外膜的脂肪和纤维组织。然后,用含抗生素的D-Hanks’液冲洗血管的外表面及血管腔内的凝血数次,再放入另一无菌培养皿中。


    3. 用眼科剪纵向剪开血管,平展在培养皿中。用非常锐利的手术刀将其切成1 mm3大小的动脉植 块(或者用剪刀剪,依照个人习惯),然后种植到培养瓶或培养皿(培养瓶或皿用1%明胶预置 37℃下过夜, 使用前2h 移入CO2培养箱中。用时可以先经含 10%小牛血清的培养液冲洗)。将动脉植块的内膜面与瓶底接触,种植密度约为 1 块/cm2 。


    4. 置培养箱中静置2 h(干贴壁)。然后,加入0.5 ml 含 25%胎牛血清的培养液,液量以略盖过动脉植块内膜面,而又不使植块漂浮为宜。24 h 后,更换培养液,加入 2-3 ml 培养液。


    5. 72 h 左右的时候,当观察到内皮细胞充分长出,而成纤维细胞刚要长出的时候,将动脉植块除去,刮除成纤维细胞,换培养液1 次。以后每2 天换液一次,每次换1/2~1/3 的液量。继续培养 8-10 d, 细胞融合成单层,即可传代。


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