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    细胞传代的方法和注意事项都有哪些?

    发布时间: 2021-12-08  点击次数: 701次

    在细胞传代时,都应该用哪种方法较为合适?或者在做细胞传代时都应注意哪些事项呢?怎样才能做好细胞传代让接下的实验更顺呢?带着这些疑问,本期小编汇总些细胞传代的经验分享给大家,希望对大家做细胞传代时有所帮助。


    1、细胞传代的方法都有哪些?

    根据不同的细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打。


    2、原代培养的第一次传代应注意的问题?

    细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前,不要急于传代;原代培养时细胞多为混杂生长,不同的细胞有不同的消化时间,因此要根据需要注意观察及时处理,并根据不同细胞对胰蛋白酶的耐受时间而分离和纯化所需要的细胞;

    吹打细胞时动作要轻巧尽可能减少对细胞的损伤;第一次传代时细胞接种数量要多一些,使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增值;随消化分离而脱落的组织块也可一并传入新的培养瓶。


    3、使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的?应如何处理?

    EDTA作用较胰蛋白酶缓和,主要作用在于能从组织生存环境中吸取Ca2+、Mg2+,这些离子是维持组织完整的重要因素。但EDTA单独使用不能使细胞完全分散,因而常与胰蛋白酶按不同比例混合使用,效果较好。常用比例为1:1或者2份EDTA:1份胰蛋白酶。EDTA的工作液浓度为0.02%,用不含Ca2+、Mg2+的BSS配置。如果使用EDTA,在终止消化前,需用缓冲液将消化液清除后才能加培养液。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于 –20 ℃,避免反复冷冻解冻造成胰蛋白酶的活性降低,并可减少污染的机会。


    4、欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?

    欲回收动物细胞,其离心速率一般为800~1000 rpm,5~10 分钟,过高的转速,将造成细胞死亡。


    5、细胞的接种密度为何?

    依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的重要原因之一。


    6、细胞交叉污染的可能原因?

    多种细胞系进行维持传代操作时,各细胞系所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。


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