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    小鼠皮肤冷冻包埋实验步骤

    发布时间: 2021-12-12  点击次数: 1182次

    简介


    对皮肤的冷冻切片进行油红 0 染色可以分析皮脂腺的油脂分泌功能和皮下脂肪层的形态,常用于小鼠皮肤炎症及皮脂腺相关研究。


    材料与仪器


    器材:液氮、铝箔、解剖工具、小鼠等
    试剂:
    ① 多聚甲醛(Sigma-Aldrich)
    ② 冷冻包埋剂


    步骤


    小鼠皮肤冷冻包埋实验的基本过程可分为如下几步:
    A. 对小鼠处以安乐后,从背部剪下方形皮肤组织,将该皮肤贴到干净的滤纸上,用至少 20 倍体积的 4% 多聚甲醛固定过夜(20 小时,< 24 小时)。注意:把皮肤贴到滤纸上时,用镊子轻轻把皮肤展开,既不要留下皱褶,也不要太用力拉扯而使组织结构变形。
    B. 将固定好的皮肤放入装有蒸馏水的 50 ml 试管中进行清洗,清洗过程中可以将试管放于脱色摇床上,用较低的速度轻轻摇动约 30 分钟。
    C. 将清洗完毕的皮肤放入至少 20 倍皮肤体积的 30% 的蔗糖溶液(溶于 PB)中,放置于 4 ℃,直到组织下沉到管底。
    D. 将铝箔叠成小槽子,加入适量冷冻包埋剂。将皮肤组织从蔗糖溶液中取出,先用包埋剂包裹润湿两遍,以去掉原来的水相,再把组织放入小槽子,调整好方向。
    E. 马上小心地把小槽子的底部浸入预先准备好的液氮中,注意不要使组织的方向改变。等包埋剂凝固后,把组织块保存在 -20 ℃ 或 -80 ℃。切片可用于油红染色或免疫荧光。


    注意事项


    1. 固定液的选择应该根据具体的实验要求确定。多聚甲醛是很常用的固定液,适合进行免疫组化,免疫荧光等方面的实验;如果只是进行形态的观察(HE 染色),可以选用 Bouin 固定液;如果要进行电镜分析的小体积样品,则建议采用戊二醛进行固定。
    2. 当组织在蔗糖溶液中刚沉下时,即可包埋。
    3. 包埋时要用细镊子小心调整包埋方向,以便今后切片能切到完整的毛囊。


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