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    缓冲液梯度测序胶

    发布时间: 2021-12-15  点击次数: 121次

    原理


    在本实验方案,测序胶底部的缓冲液浓度大于其顶部浓度,使得短寡核苷酸片段(胶底部)的迁移率相对比长寡核苷酸(顶部)的迁移率要慢一些,这洋凝胶可电泳更长的时间而不至于短核苷醆从底部走失并改善了长核苷酸链的分离度。


    材料与仪器

    DNA
    TEMED SDS TBE
    烧杯 电泳仪

    步骤


    1.  按基本方案步骤1~5组装凝胶平板夹层。
     
    2.  在2个100 ml 烧杯中,配制缓冲液梯度凝胶溶液:50 ml 用0.5×TBE配制,25 ml 用2.5×TBE配制,在50℃以下加热至固体完全溶解,冷却至室 温,加人20 μl TEMED和200 μl 10%SDS过硫酸氨于0.5 ×TBE / 凝胶溶液,轻轻混匀。加入10 μl TEMED及100 μl 10%过硫酸铵于2.5×TBE / 凝胶溶液中轻轻混匀。
     
    3.  用23 ml 带橡皮吸球的吸管,吸出12.5 ml 清亮的0.5×TBE / 凝胶溶液,接着吸出12.5 ml 2.5×TBE / 凝胶溶液,可通过轻轻挤压橡皮吸球以引进3~4个气泡。
     
    4.  缓缓平稳地将溶液注入胶模的夹层,接着用同一吸管,加入剩余的0.5×TBE凝胶溶液。如基本方案步骤8~10,插入梳子,安装夹子,观察凝胶的聚合。

    5.  按基本方案步骤11~33电泳及处理凝胶。


    同实验其他方法

    变性凝胶电泳实验

    1.  制作每块凝胶时,首先要用肥皂及水小心严格地清洗两块30 cm×40 cm的前后玻璃平板,用去离子水冲洗后晾干,用喷射洗瓶喷10%乙酵或异丙醇使平板湿海。 2.  然后用Kimwi

    电解质梯度测序胶

    1.  按基本方案步骤1~22灌制凝胶及进行预电泳,但上槽缓冲液为0.5×TBE,下槽为1×TBE。 2.  按基本方案步骤23~26步准备样品及加样。   3.

    含甲酰胺的测序胶

    1.  按基本方案步骤1~5组装凝胶平板夹层。   2.  按所需浓度配制甲酰胺凝胶溶液,加热轻轻挽拌使之溶解,冷却至30℃以下。 3.  加入0.15 ml TEMED

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