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    原位裂解细胞的CAT分析法

    发布时间: 2021-12-15  点击次数: 119次

    材料与仪器

    转染细胞
    Triton裂解液
    培养皿 培养箱

    步骤

    1.  60 mm 培养皿中转染了CAT表达质粒的细胞,用2 ml PBS洗1次。每培养皿加入2 ml 低渗缓冲液,在室温下温育2~5 min。

    2.  吸去低渗缓冲液,加入400 μl Triton裂解液。用橡胶刮子将细胞刮离培养血,用1 000 μl 移液器将裂解物移入1.5  ml 微量离心管中。

    3.  微量离心1 min 除去细胞核,不可溶性蛋白。将上清转入一个干净的微量离心管中, 进行CAT活性分析。

     


    同实验其他方法

    CAT活性的层析分析法

    1.  100 mm 培养皿中的转染了CAT表达质粒的贴壁细胞,用PBS洗两次,每次5 ml每培养皿加入1 ml TEN溶液。将细胞置于冰浴5 min。   2.  用橡胶

    CAT活性的相-抽提分析法

    一、来源于哺乳动物细胞 1.  按“CAT活性的层析分析法"中的步骤1~5的冻融法,制备哺乳动物细胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制细胞方法来收集细胞,则将原位裂解法的步骤1至4用以下的步骤2

    人生长激素的放射免疫分析法

    1.  取转染了hGH表达质粒的哺乳动物细胞的培养液100~500 μl。 2.  加100 μl 培养液或标准品至12 mm×75 mm 圆底试管中。加入100 μl 125I-

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