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    含甲酰胺的测序胶

    发布时间: 2021-12-15  点击次数: 229次

    原理

    聚丙烯酰胺凝胶加人甲酰胺可以使造成条带压缩的测序产物的二级结构不稳定。

    材料与仪器

    DNA
    甲酰胺 甲醇 乙醇 TEMED SDS
    电泳仪

    步骤

    1.  按基本方案步骤1~5组装凝胶平板夹层。

     
    2.  按所需浓度配制甲酰胺凝胶溶液,加热轻轻挽拌使之溶解,冷却至30℃以下。

    3.  加入0.15 ml TEMED及1 ml 10%过硫酸铵,马上灌胶于凝胶平板夹层,观察聚合情况。

    4.  在45~70 W 恒功率下电泳。
     
    5.  按基本方案步骤19~33进行干胶及处理,但步骤18在5%乙酸 / 20%甲醇固定液中固定凝胶15 min。


    同实验其他方法

    变性凝胶电泳实验

    1.  制作每块凝胶时,首先要用肥皂及水小心严格地清洗两块30 cm×40 cm的前后玻璃平板,用去离子水冲洗后晾干,用喷射洗瓶喷10%乙酵或异丙醇使平板湿海。 2.  然后用Kimwi

    电解质梯度测序胶

    1.  按基本方案步骤1~22灌制凝胶及进行预电泳,但上槽缓冲液为0.5×TBE,下槽为1×TBE。 2.  按基本方案步骤23~26步准备样品及加样。   3.

    缓冲液梯度测序胶

    1.  按基本方案步骤1~5组装凝胶平板夹层。   2.  在2个100 ml 烧杯中,配制缓冲液梯度凝胶溶液:50 ml 用0.5×TBE配制,25 ml 用2.5×TBE配制

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