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    人生长激素的放射免疫分析法

    发布时间: 2021-12-16  点击次数: 390次

    材料与仪器

    hGH表达质粒
    洗涤液 亲和素包被珠
    试管 γ计数仪

    步骤


    1.  取转染了hGH表达质粒的哺乳动物细胞的培养液100~500 μl。

    2.  加100 μl 培养液或标准品至12 mm×75 mm 圆底试管中。加入100 μl 125I-标记的抗体溶液,混合。加入1颗亲和素包被珠,盖上试管盖或用Parafilm膜封口,室温下在一水平旋转器上以约170 r/min 摇动下温育90 min。

    3.  加2 ml 冼涤液洗磁珠两次。*吸干洗涤液。
     
    图一、人生长激素表达载体
    图一、人生长激素表达载体
     
    4.  将试管置于γ计数仪上计数1 min。
     
    5.  用试剂盒中的hGH标准品测得的数据绘制标准曲线。用这个标准曲线来计算未知样品的hGH含量。


    同实验其他方法

    CAT活性的层析分析法

    1.  100 mm 培养皿中的转染了CAT表达质粒的贴壁细胞,用PBS洗两次,每次5 ml每培养皿加入1 ml TEN溶液。将细胞置于冰浴5 min。   2.  用橡胶

    原位裂解细胞的CAT分析法

    1.  60 mm 培养皿中转染了CAT表达质粒的细胞,用2 ml PBS洗1次。每培养皿加入2 ml 低渗缓冲液,在室温下温育2~5 min。 2.  吸去低渗缓冲液,加入400 μl T

    CAT活性的相-抽提分析法

    一、来源于哺乳动物细胞 1.  按“CAT活性的层析分析法"中的步骤1~5的冻融法,制备哺乳动物细胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制细胞方法来收集细胞,则将原位裂解法的步骤1至4用以下的步骤2

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