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    人生长激素的放射免疫分析法

    发布时间: 2021-12-16  点击次数: 201次

    材料与仪器

    hGH表达质粒
    洗涤液 亲和素包被珠
    试管 γ计数仪

    步骤


    1.  取转染了hGH表达质粒的哺乳动物细胞的培养液100~500 μl。

    2.  加100 μl 培养液或标准品至12 mm×75 mm 圆底试管中。加入100 μl 125I-标记的抗体溶液,混合。加入1颗亲和素包被珠,盖上试管盖或用Parafilm膜封口,室温下在一水平旋转器上以约170 r/min 摇动下温育90 min。

    3.  加2 ml 冼涤液洗磁珠两次。完全吸干洗涤液。
     
    图一、人生长激素表达载体
    图一、人生长激素表达载体
     
    4.  将试管置于γ计数仪上计数1 min。
     
    5.  用试剂盒中的hGH标准品测得的数据绘制标准曲线。用这个标准曲线来计算未知样品的hGH含量。


    同实验其他方法

    CAT活性的层析分析法

    1.  100 mm 培养皿中的转染了CAT表达质粒的贴壁细胞,用PBS洗两次,每次5 ml每培养皿加入1 ml TEN溶液。将细胞置于冰浴5 min。   2.  用橡胶

    原位裂解细胞的CAT分析法

    1.  60 mm 培养皿中转染了CAT表达质粒的细胞,用2 ml PBS洗1次。每培养皿加入2 ml 低渗缓冲液,在室温下温育2~5 min。 2.  吸去低渗缓冲液,加入400 μl T

    CAT活性的相-抽提分析法

    一、来源于哺乳动物细胞 1.  按“CAT活性的层析分析法"中的步骤1~5的冻融法,制备哺乳动物细胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制细胞方法来收集细胞,则将原位裂解法的步骤1至4用以下的步骤2

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