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    测定用乙醇固定的 DNA 的含量

    发布时间: 2021-12-17  点击次数: 238次

    原理

    DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰,利用这个原理我们测其OD260,再推算出其浓度。

    材料与仪器

    细胞样品
    PBS缓冲液 70%乙醇 PI液
    离心机 恒温箱 筛网

    步骤


    一、培养细胞的 DNA 含量的测定


    制备单细胞悬液于 200μ l 的 PBS 缓冲液中; 加入 2ml 预冷的 70%乙醇,4℃保存;


    1. 取单细胞悬液 1——2×106 个细胞于 PBS(PH=7.2)缓冲液中;


    2. 300g 离心 5 分钟,弃上清,反复两次;


    3. 重悬细胞于 0.5ml PBS 缓冲液中;


    4. 将细胞悬液放置于 2——3ml 冷 70%乙醇中,混匀,保存于4℃,至少30 分钟。 在 4℃条件下可保存 2——3 周。


    2、新鲜组织的 DNA 含量的测定


    1. 用 200mg 湿重组织用机械法制成单细胞悬液;


    2. 500g 离心 5 分钟;


    3. 弃上清,重悬于 10ml 染色- 去污剂中;


    4. 再过滤,用 200 目的筛网或 70——80μm 的筛网过滤;


    5. 上机检测。


    3、石蜡包埋组织切片的 DNA 含量的测定


    1. 从石蜡包埋切取切片 50 μ m 厚,2——3 片,制成单细胞悬液;


    2. 用 PBS 缓冲液洗涤,500g 离心 5 分钟,弃上清;


    3. 加入 PI 液 1ml 室温避光 30 分钟;


    4. 调整细胞浓度为 1×106/ml;


    5. 上机检测。


    注意事项

    1. 根据实验的要求,固定剂也可选用 1——3%多聚甲醛;


    2. 将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至 0——4℃;


    3. 细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增 加,并不断震摇,以免细胞成团(特别是用乙醇固定时) .


    常见问题

    如果想要检测样品的纯度,那么还要再测一次280nm处OD值,计算二者的比率,若比率接近2,说明样品纯度较高。

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    安培生物科技有限公司介绍:

    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。



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