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    乙醇沉淀法

    发布时间: 2021-12-17  点击次数: 416次

    原理

    DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。

    材料与仪器

    DNA
    乙酸钠 乙醇
    EP管 低温离心机 移液器 -70度冰箱

    步骤


    1. 酶切前确定待切样品的浓度, 并选择合适的限制性内切酶和配套Buffer。
     
    2. 在离心管中加入如下成分:
    10xBuffer   1ul
    待切样品   xul
    酶      0.5-1ul
    ______________________
    加水补足10ul
     
    3. 混匀样品并短暂离心使样品沉于管底。
     
    4. 将离心管置于37℃中温育1-3hr,若待切样品为PCR 产物,则可将反应时间适当延长。
     
    5. 用未酶切的质粒作为对照,琼脂糖电泳鉴定酶切结果。
     
    注:当酶切样品用于回收而不是鉴定时,可按比例适当加大反应体积。双酶切可选用二者活性都较高的Buffer 或者通用Buffer,但要注意不能有星反应。


    注意事项

    移去上清液时需要缓慢操作,以免将DNA样品弄出。

    常见问题

    乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。

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