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    Biozellen®3D细胞培养基质胶在3D细胞球体培养试验

    发布时间: 2022-02-21  点击次数: 1409次
    3D 细胞球体培养试验步骤:
    A、试剂制备
    1、A 基质胶:将 A 基质胶溶于 37℃水浴槽回温 10 分钟, 确认*融解.
    2、C 缓冲溶液(1X)制备:使用前将 10X C 缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如: 无血清 DMEM、opt-MEM)制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .
    3、D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液.
    B、Biozellen®3D 细胞培养基质胶的制备
    全部步骤需要在无菌环境内操作,操作步骤如下:
    1、将 24 孔培养板放置于冰上预冷半小时。
    2、细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 细胞培养基均匀混合,并与 0.5 毫升 37℃ A 胶按照 1:1 等比例均匀混合,最终细胞密度 1*105~1*107cells/mL。
    注:请选择适当的培养溶液与条件进行试验。
    3、取 20-40 微升步骤 2 的混合液滴于 步骤 1 预冷的培养板上,胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体是否成胶,可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。
    4、待胶体成胶后,添加 1 毫升冰的 1X C 缓冲溶液,并盖过步骤 3 的胶溶液,固定 15 分钟。
    5、待 15 分钟固定后,小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。
    6、将含有细胞的胶于 37°C 二氧化碳培养箱内进行 7~14 天的培养,并观察细胞球体的形成,按正常培养基更换频率进行更换操作。
    C、溶胶与收集细胞球体准备程序
    1、小心的将培养基吸取移除,并用 1X PBS 进行清洗。
    2、小心的将 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的 D 缓冲溶液,盖过胶滴于室温反应 5 分钟。
    3、温和的用 1 毫升移液管吸取,直到胶滴*溶解。
    4、将含有细胞球体的溶液吸入 1.5 毫升离心管,用 1000 rpm 的转速离心 10 分钟,移除上清液体并收集细胞球体做分析。
    D、收集单颗细胞准备程序
    在分离单细胞前,先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作
    1、添加 trypsin-EDTA 并与收集的细胞球体于 37°C 混合反应。
    2、用 1 毫升移液管混合,直到细胞体*分解。
    3、待细胞球体*分解,加入 3 倍体积的 1X PBS,并用 1000 转的转速进行离心 10 分钟,并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。

     

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    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。

     

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