一、细胞诱导前可使用多聚赖氨酸溶液进行细胞包被，以便细胞更好的进行贴壁。
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诱导与检测方法
发布时间： 2022-02-28 点击次数： 852次同学A：
使用细胞细胞包被液包被细胞培养板，将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到6孔板上，密度为2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔，置于37℃，5% CO2培养箱中培养，当细胞汇合度达到80%-90%时，小心的将孔内间充质干细胞培养基吸掉，向6孔板中加入2mL人间充质干细胞脂肪分化培养基（此套装包含基础500ml，脂肪细胞分化因子：5ml,干细胞生长维持因子：5ml,胎牛血清：25ml ),以此记为第0天。
二、每隔1-2天更换新鲜的人间充质干细胞脂肪分化培养基；
注意：为防止脂肪细胞脱落，建议诱导过程中出现大量脂肪细胞结节之后，换液形式变为每天一次半量换液。
三、 诱导14-21天期间，视细胞的形态变化及生长情况进行染色。
❤ 以下是总结的染色方法
脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片。各有操作稍有差异。
一
*成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题。
二
细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的。操作务必要轻柔。不要把细胞冲掉。
三
如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻切片要适当厚一些，一般为10-15µm，切片太薄容易导致脂肪流失
四
如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑波长，激发波长/发射波长=485nm/572nm
诱导的小鼠MMSC-BM的成脂肪细胞
五
染色步骤：
（1） 先小心轻缓倒去培养液。
（2） 用pbs轻缓漂洗。
（3）加10%中性甲醛或者95%以上的酒精固定30min以上
（4） 稀释改良型即用油红染色试剂盒，油红：PBS＝3:2，室温放置10min
（5）染色10-20min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml。
（6）脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（7） 复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
（8）甘油明胶封片（封片后可长期保存）。（9） 若不用明胶封片，请尽快拍照。
同学B：
油红O染色试剂盒在传代培养中，接种密度是影响体外培养间质干细胞增殖潜能的重要因素。低密度接种时，间质干细胞的增殖能力明显提高，而诱导细胞分化时则需要较高的细胞密度，这可能与分化时细胞与细胞间的相互作用有关。而在培养过程中，若细胞过度融合会促进其分化趋向，故要保持干细胞未分化状态，要及时传代。
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