销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 诱导与检测方法

    诱导与检测方法

    发布时间: 2022-02-28  点击次数: 279次

    同学A:


    使用细胞细胞包被液包被细胞培养板,将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到6孔板上,密度为2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔,置于37℃,5% CO2培养箱中培养,当细胞汇合度达到80%-90%时,小心的将孔内间充质干细胞培养基吸掉,向6孔板中加入2mL人间充质干细胞脂肪分化培养基(此套装包含基础500ml,脂肪细胞分化因子:5ml,干细胞生长维持因子:5ml,胎牛血清:25ml ),以此记为第0天。



    一、细胞诱导前可使用多聚赖氨酸溶液进行细胞包被,以便细胞更好的进行贴壁。



    二、每隔1-2天更换新鲜的人间充质干细胞脂肪分化培养基;

    注意:为防止脂肪细胞脱落,建议诱导过程中出现大量脂肪细胞结节之后,换液形式变为每天一次半量换液。


    三、 诱导14-21天期间,视细胞的形态变化及生长情况进行染色。


    ❤ 





    以下是总结的染色方法     

    脂肪油红染色,有的是动物/人体脂肪组织切片,或细胞爬片。各有操作稍有差异。


    完全成熟饱满的脂肪细胞,容易破裂,脂滴泄漏,所以压片,切片都要考虑到这个问题。 


    细胞爬片细胞溶液脱落,特别是脂滴大的。操作务必要轻柔。不要把细胞冲掉。


    如果做脂肪组织冰冻切片,冰冻切片要适当厚一些,一般为10-15µm,切片太薄容易导致脂肪流失


    如果培养载体为塑料制品,hoechst33342染核的话,塑料板自发荧光也为蓝色,必须考虑波长,激发波长/发射波长=485nm/572nm



    诱导的小鼠MMSC-BM的成脂肪细胞

    染色步骤:

    (1) 先小心轻缓倒去培养液。 
    (2) 用pbs轻缓漂洗。
    (3)加10%中性甲醛或者95%以上的酒精固定30min以上
    (4) 稀释改良型即用油红染色试剂盒,油红:PBS=3:2,室温放置10min
    (5)染色10-20min左右,加的体积覆盖住板底即可,如6孔加1.5ml,24孔加0.5-1ml。
    (6)脱色,用75%酒精/60%异丙醇漂洗,除去多余的染料

    (7) 复染,淡苏木染色1/5分钟,pbs漂洗(这一步不做也可,看试验需要,并且苏木素会把胞浆染红,如要显示核, hoechst33342也可以,浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上)。
    (8)甘油明胶封片(封片后可长期保存)。

    (9) 若不用明胶封片,请尽快拍照。


    同学B:

    油红O染色试剂盒在传代培养中,接种密度是影响体外培养间质干细胞增殖潜能的重要因素。低密度接种时,间质干细胞的增殖能力明显提高,而诱导细胞分化时则需要较高的细胞密度,这可能与分化时细胞与细胞间的相互作用有关。而在培养过程中,若细胞过度融合会促进其分化趋向,故要保持干细胞未分化状态,要及时传代。


    以上就是本期的内容,更多资讯,欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯

     

    安培生物科技有限公司介绍:

    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。




在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]