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    细胞侵袭实验详解剖析

    发布时间: 2022-04-13  点击次数: 160次
    细胞侵袭也是与转移密不可分的。那么今天要分享的是最为常用的细胞侵袭方法:Transwell侵袭实验。与细胞划痕实验相比,Transwell相对过程复杂一些,下面就一起看看肿瘤细胞Transwell侵袭实验吧!


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      细胞侵袭实验示意图 

    首先,为了对肿瘤侵袭和转移有更加清晰的理解,我们先来了解一下,肿瘤细胞转移的过程,主要包括以下5个过程:原位侵袭(Local invasion),肿瘤细胞内渗(Intravasation),循环系统存活(Survival in thecirculation),肿瘤细胞外渗(Extravasation),形成转移灶(Micrometastasis formation)等。其中细胞侵袭便发生在第一步,即肿瘤细胞在原位突破基底膜,然后内渗进入血管、淋巴管的过程,后期才开始进行转移。
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      肿瘤细胞转移的过程  

    Trans可译为转移,穿过,而well则为小室的意思。外形如同一个小杯子(如下图),杯底有通透性的膜(孔径0.1-12.0µm,细胞侵袭一般用8.0、12.0μm)。
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    Transwell原理简单来说,就是将Transwell小室放入培养板中,并将高营养液与低营养液用一层膜隔开,并在膜上室铺基质胶,用来模拟体内细胞外基质。肿瘤细胞放在低营养液中,为了获得更多的营养吃的更饱,这些细胞需先分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解,才能穿过这层膜,进入高营养液,最后通过计数下室的细胞量即可反映肿瘤细胞的侵袭能力。细胞Transwell实验,可作为一种非常简便的研究肿瘤细胞迁移、侵袭以及转移情况的方法。
     
    实验做完后就是最重要的结果统计了!

    检测穿过的细胞数一般有两种方法:

    1.直接计数法
    ①“贴壁"细胞计数
    这里所谓的“贴壁"是指细胞穿过膜后,可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。可以通过给细胞染色(如结晶紫染色、台盼蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色),在镜下计数细胞。
    ②“非贴壁"细胞计数
    由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系,有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上,而是掉进下室。这种情况下可以收集下层培养液,用流式细胞仪计数细胞量,也可用细胞计数的方法直接在镜下计数。
     
    2.间接计数法
    间接计数法主要用于穿过细胞过多,而无法通过计数获得准确的细胞数所采用的方法,通过标记、染色处理(例如MTT法、荧光试剂检测、结晶紫检测)后,测量OD值或荧光值,间接反映细胞数量。
     
    文章中出现的Transwell侵袭实验图一般是这样的:
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    (小tips:NC 即Negative control,表示阴性对照,siRNA上期刚说过,大家还记得吗?
    文章中大家可能还会遇到MOCK组,其实就是空白对照。所谓的空白对照有两种:一种是什么也不处理,类似阴性对照组;一种是只加转染试剂,不加转染的质粒或者siRNA,类似假手术组)
     
    这张图表示的是NC组(对照组)细胞侵袭少于siRNA组(沉默某基因的表达),可以理解为沉默某基因后,可以促进HGC-27细胞的侵袭。
     
    当然,这张图是比较简单的,复杂一点的无非就是条件多了,数据多了,大家只要理清楚细胞侵袭实验的原理,知道图是怎么做出来的,对应着图注都可以很轻松的理解图所表达的意思。



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