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    Biozellen植物源基质胶血管生成实验的操作应用

    发布时间: 2022-04-14  点击次数: 141次

    Biozellen植物源基质胶在内皮细胞血管生成实验的操作应用

    内皮细胞血管生成实验步骤

    A、试验材料准备:

    1、内皮细胞:脐带内皮细胞(实验使用细胞代数需低于五代)

    2、内皮细胞专用培养液(含内皮生长所需因子): 自己配置 or 采购市售专用内皮细胞培养液 (如购自Lonza或者Promocell等品牌)

    3、生长因子:VEGF,Heparin等(如购自Sigma)

    B、胶体制备试剂准备:

    1、A胶(1X)制备:将 A胶 (2X) 置于37℃水浴槽回温10分钟,确认完全溶解。A胶(2X)与含有生长因子(例如VEGF等)的内皮细胞专用培养液,按照1:1比例混合均匀。(例如:将37℃水浴回温的内皮细胞专用培养液取 0.5mL,直接加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A胶 (2X),配置成 1 mL 的 A胶 (1X)。使用前置于37 ℃,可降低黏度。建议单次使用,勿重复冷冻解冻 A胶 (1X) )

    2、A胶 (0.5X) 制备:将上述步骤1的 A胶 (1X)与含有生长因子的内皮细胞专用培养液,按照1:1比例混合均匀。

    3、C缓冲溶液 (5 X) 制备 : C缓冲溶液 (10 X) 与预冷的含有生长因子的内皮细胞专用培养液,按照 1:1 比例混合均匀。(例如 : 0.5 mL C缓冲溶液 (10 X) + 0.5 mL 含有生长因子的内皮细胞专用培养液)

    C、内皮小管生成实验准备程序:

    1、 96 孔细胞培养板放置于冰上。

    2、加入 50 μl A胶 (0.5X) 平铺到96孔细胞培养板内。

    3、将步骤 2 的培养板置于冰上 10 分钟。

    4、加入 100 μl 冰的C缓冲溶液(5 X),盖过步骤3的A胶,在冰上反应15分钟.(C缓冲溶液用于A胶凝胶反应)

    5、待反应15分钟后,小心的吸出 C 缓冲溶液。

    6、加入100μl含有生长因子5 μg/ml VEGF及0.25 mM Heparin之内皮细胞悬浮液,使每孔细胞数目为2.5x10^4 cells/well (细胞浓度为2.5 x 105 cells/mL)。

    6.1、():建议添加VEGF及Heparin方式如下,取1 mL细胞浓度2.5 x 105 cells/mL的内皮细胞悬浮液进行离心,并收集细胞沉淀。 细胞沉淀物先与0.125 mL的40 μg/ml VEGF及0.125 mL,2 mM Heparin 进行混合5-10分钟。最后再加入0.75 mL细胞培养液,使VEGF最终浓度为5 μg/ml、Heparin最终浓度为0.25 mM及细胞浓度为2.5 x 105 cells/mL。

    7、将细胞培养板在37 ℃, 5 % CO2培养箱培养12小时内完成。(建议内皮细胞观察时间为6-8小时)

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    在内皮细胞血管生成实验的应用编辑

    在内皮细胞血管生成实验中所用到的基质胶产品信息:

     

    美国Biozellen植物源基质胶(货号B-P-00002系列)编辑

    产品描述Biozellen®3D细胞培养基质胶套装包含整套基质胶、胶体固定液、胶体溶解液,可应用到 3D 细胞培养与微环境应用等;本试剂盒操作便利且可调控基质胶硬度进行多种细胞培养测试等;胶体可快速被固定液分解。(Biozellen®3D细胞培养基质胶套装为植物来源,无动物源成分、不含酚红)

    货号: B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

    规格: 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

    保存条件:4℃保存、 保存两年

     

    安培生物科技有限公司是美国Biozellen公司的中国代理商。Biozellen®3D细胞/类器官培养基质胶现货供应,经验证可完全替代BD/康宁的基质胶,来源为植物源且氨基酸序列人源化,无人畜共患病的病原菌或毒素污染,提供完整售后服务和技术支持。

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