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    免疫细胞转染实操时的几大步骤说明

    发布时间: 2022-10-09  点击次数: 62次
       对于免疫细胞转染实验,我们拿脂质体为例,其作为体内和体外输送载体的工具,已经研究的十分广泛,中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。
      具体实操时的步骤如下:
      1.细胞培养:取6cm细胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液,37℃二氧化碳培养密度至40%~60%,密度过大,转染后不利筛选细胞。
      2.转染液在EP管中制备(为转染每一个孔细胞所用的量):
      A液:用不含血清培养基稀释1ug质粒DNA;
      B液:用不含血清培养基稀释2ul脂质体。
      分别将A液与B液轻弹混匀,静置5分钟。
      3.吸取B液加入至A液中,轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
      4.转染准备:用1mL不含血清培养液漂洗两次,再加入4mL不含血清培养液。
      5.转染:把A/B复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37℃恒温箱置6~24小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。
      6.瞬时转染后,可在48-72h细胞长满之后,提取细胞蛋白或者RNA,验证敲减/过表达效率。
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