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    原代细胞转染试剂的转染操作指导

    发布时间: 2022-09-08  点击次数: 33次
       细胞转染是外源基因进入真核细胞的一种重要方法。这些外源DNA或RNA通过原代细胞转染试剂的包装辅助才能顺利进入细胞,发挥相应的作用,进而研究其细胞功能及相应的影响。广泛用于基因功能研究、调控基因表达、癌症、疾病模型相关研究和重组蛋白研究等生物学试验。细胞转染试剂的转染效率高,细胞毒性小,适合各种核酸分子或蛋白质的转染实验。
      目前原代细胞转染试剂的转染操作主要有三种方法:生物转染,物理转染和化学转染。
      生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体,以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。
      物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因枪,无论哪一种都需要特定的设备,且性能好的设备价格也都很昂贵。
      化学转染方法是生物医学研究中常用的转染方法,主要包括阳离子脂质体和阳离子聚合物。其基本原理是利用阳离子的化学分子与带有负电荷的核酸通过正负电荷作用形成稳定的复合物。
      一方面使复合体整体带上正电荷(多数细胞膜表面带有弱的负电荷,通过电荷作用吸引复合体到细胞膜表面);
      另一方面对线性的核酸进行浓缩,使其体积变小更易穿透细胞膜。
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