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    如何做好HE染色?

    发布时间: 2022-10-25  点击次数: 255次
    HE染色是组织切片最为常用的染色法之一。其中,苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸表现为蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分呈现红色。



    但如何保证自己每一次都能完成漂亮的染色呢?有道是老马都可以失前蹄儿,为了让大家对HE染色有着更清晰的认识,小编搜集查询了下面的内容,希望能对大家的染色技巧有一定的提升。


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    颜色篇


    (1)染色结果红蓝失调
    偏蓝,苏木精染色过深或伊红染色时间太短导致其分化过度;偏红,细胞核未成功染色,苏木精染色过浅或伊红染色过深,脱蜡不透彻也是一个原因。

    (2)细胞核染色问题
    细胞核颜色暗淡,可能原因是苏木精染液染色时间过短或者苏木精过度氧化失效。这种情况是可以重新染色的,只需要将组织切片放入0.01%氢氧化钠溶液、0.5%氨水溶液、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液中,每个大概3-5min即可重新染色。
    细胞核颜色过深,抛开切片本身厚度问题则可能是苏木精染色停留时间相对过长造成的,如果是过厚则需要重新制片,不是可以重新染色。

    (3)染色不均匀
    切片过厚、厚薄不一、染色液过少都会导致染色效果不均匀的情况。此外,脱蜡前未烘烤或脱蜡不完整也会导致这种情况。

    (4)染色模糊
    切片组织固定不佳,如固定不及时或深部组织未处理;脱蜡不完整;切片包埋时温度过高,切片后烤片温度过高时间过久;乙醇可能也会导致染色模糊,乙醇可能导致组织发硬变脆造成染色模糊。水雾残留在组织上也会导致这种情况。

    (5)出现白色或黑色斑点
    黑色斑点可能是由于脱水不完整造成的残留;白色斑点可能是烤片时间过短温度偏低蜡并未全融化导致的,也可能是切片在脱蜡溶剂中停留时间相对较短导致。

    (6)淡染甚至无法染色
    出现这种情况一般是固定时使用了酸性甲醛或在甲醛中浸泡过久导致的。已经固定的切片则可尝试再次固定;已经制好的切片可以在染色前使用5%重铬酸钾溶液浸泡至少半小时后用水漂洗可改善染色效果。还可以将切片放入3%硫酸铁铵溶液中,补充染色媒介改善染色效果。

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    技术篇


    (1)苏木精
    商用染色液质量良莠不齐,如果有条件可以自己配置。使用乙酸浓度5%-7.5%和盐酸浓度为0.5%-1%的苏木精溶液放置一周,即可全成熟,染色效果好,氧化膜和结晶都很少。

    (2)冰醋酸增强染色效果
    少量的冰醋酸(小于10%)加入到伊红溶液中可以伊红与胞浆蛋白质结合增强染色效果;少量的冰醋酸(小于2%)可以苏木精染色效能,方便控制染色时间。

    (3)切片脱落
    组织本身硬度较大或坏死的在染色时就易脱落;切片过厚或者切片破碎也是脱落的原因;染色过程漂洗粗暴;反蓝液碱性过强,可以使用自来水(pH 7.5~7.8)效果可能更好;烤片时间和温度过短过低,或过久过高,一般30 min即可。

    (4)醇性HE染液与水溶性染液
    两种都是可以的。相对于醇性染色液体,水溶性染色比较自由,易操作,分辨度相对低一点。但是醇性染色液体挥发性较高,对染色技术要求较高,但是染色效果更好,分辨度更高。


     


    以上就是一些HE染色中可能出现的状况或者需要大家提前注意的内容了,分别整理为颜色篇和技术篇供大家参考,希望可以帮到大家。

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