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    多能ES细胞的培养

    发布时间: 2022-12-01  点击次数: 153次

    材料与仪器

    PBS 胰酶溶液
    MEF 滋养板 巴斯德吸管 ES 生长培养基

    步骤

    1. 准备下列试剂和材料:

    60 mm MEF 滋养板(接种不能超过 7 天)

    带棉塞无菌巴斯德吸管

    无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS

    ES 生长培养基

    胰酶溶液

    2. PBS 冲洗 ES 细胞,巴斯德吸管加胰酶溶液覆盖培养皿底(2 ml/p60)

    3. 37℃ 孵育 5 分钟左右,至细胞脱落。

    4. 巴斯德吸管轻轻吹吸胰酶处理细胞 4~6 次,分散 ES 细胞。分散的细胞,包括单细胞和小的细胞团,转移至装有 2 ml 预热(37℃)ES 生长培养基的 15 ml 离心管。

    5. 离心收集细胞。吸掉上清,留约两倍于细胞沉淀的体积。轻弹离心管悬浮细胞。加 10 ml ES 生长培养基,吹吸至悬液均匀。

    6. 计数细胞。由于 ES 细胞较 MEF 细胞小,呈圆形,二者很容易区分。

    7. ES 细胞接种 60 mm MEF 滋养板。吸掉 MEF 滋养细胞培养基,加入悬于 5 ml ES 生长培养基的 ES 细胞。

    8. 每天换一次液,加 5 ml ES 生长培养基。



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