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    EB病毒转化成淋巴细胞

    发布时间: 2022-12-01  点击次数: 151次

    材料与仪器

    全血
    刀豆凝集素A
    RPMI 生长培养基 离心管

    步骤

    1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生长培养基。

      生长培养基(RPMI1640 800 ml,FBS 200 ml,2 mmol/L-谷氨酰胺,5 μg/ml 两性霉素,50 μg/ml 庆大霉素)

      2. 取 15 ml 无菌离心管,加 3 ml Histo-paque1077(Sigma),在其上加 4 ml 稀释血,分离淋巴细胞。

      3. 室温 300 g 离心 30 分钟,弃上层清亮血浆。

      4. 收集不透明淋巴细胞层,细胞悬液倒入 50 ml 无菌离心管。

      5. 20 ml RPMI 1640 生长培养基洗两次,室温 300 g 离心 10 分钟。

      6. 10 ml 血分离的细胞悬于 1.0 ml 含 EB 病毒的上清。

      7. 细胞悬液(1.0 ml)放入 25 cm2 组织培养瓶,垂直放置,37℃ 5% CO2 孵育 1~3 小时。

      8. 孵育后,加入 3 ml 含 0.2 μg/ml 刀豆凝集素A 的 RPMI 1640 生长培养基,水平放置,使细胞均匀分布于全生长面。

      9. 每周加 1 ml 含刀豆凝集素A 的新鲜 RPMI 1640 生长培养基,不要吸出原培养基。


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