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    E玫瑰花环形成试验

    发布时间: 2022-12-02  点击次数: 258次

    原理

    正常人外周血中 T 细胞在体外能直接和绵羊红细胞(SRBC)结合形成玫瑰花样细胞团。这是因为人的T 细胞膜上具有能和SRBC 膜上的糖蛋白相结合的受体,称为E 受体。已证实E 受体是人T 细胞所特有的表面标志,因此本试验可作为人外周血T 细胞的鉴定和计数,同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标,也是分离T 细胞的常用方法之一。本实验为示教内容,学生只看结果。

    材料与仪器

    肝素抗凝人外周血
    淋巴细胞分层液 SRBC悬液 Hank's液 NBS
    血球计数板 尖吸管 载玻片 瑞氏染液

    步骤

    1.  取肝素抗凝血1 ml 加1 ml Hank's 液,混匀后用尖吸管将其加在2 ml分层液上。
     

    2.  离心2000 rpm,30 分钟,用尖吸管吸取血浆与分层液界面处富含淋巴细胞的悬液置于另一洁净试管中。
     
    3.  用Hank's 液以1000 rpm,离心10 分冲洗细胞两次,末次弃上清后再加入Hank's液1 ml,混匀,用微量加样器吸取0.02 ml 加于0.38 ml 白细胞计数液中,在血球计数板上于低倍镜下计数,并根据下式算出每毫升细胞数。然后用Hank's液配制成107 /ml细胞悬液。

     
    4.  取107 /ml细胞悬液0.1 ml加0.1 ml经SRBC吸收的灭活NBS,再加0.2 ml0.5 %SRBC悬液,混匀,放37 ℃温箱5 分钟,低速离心500 rpm,5 分钟,然后放4 ℃冰箱2 小时或过夜。
     
    5.  取出试管,轻轻使沉淀的细胞悬浮,用尖吸管取出一滴置于载玻片上,盖上已滴加瑞氏染液的盖玻片,于高倍镜下观察计数。


    注意事项

    1.  SRBC 自绵羊体内取出后限在2 周内使用。

    常见问题

    一、实验结果
     

    计数 200 个淋巴细胞,凡结合3 个SRBC 以上者为E 玫瑰花阳性细胞,求出百分率即为T 细胞百分比。正常值为68±9.9%。



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