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    平滑肌细胞的分离和培养

    发布时间: 2022-12-09  点击次数: 169次

    料与仪器

    0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液
    平滑肌培养液
    Petri培养皿 手术刀和10号手术刀片 解剖剪 组织镊

    步骤

    1. 从小牛取胸主动脉。

    2. 将胸主动脉浸入 Hanks 液。

    3. 分离细胞之前将动脉放在冰上。

    4. 将动脉放入 150 mm × 25 mm Petri 培养皿。

    5. 用解剖剪沿长轴剪开动脉。

    6. 用手术刀片轻刮动脉内腔面,以除去内皮细胞。

    7. 将动脉的中膜与内膜和外膜分离。

    8. 将中膜切成约 1 cm2 大小的组织块。

    9. 将中膜组织块放入 60 mm × 15 mm Petri 培养皿,内膜侧朝下。

    10. 让组织块贴壁约 10 min。

    11. 直接在组织块上注 1 ml SMCM(平滑肌培养液(smooth muscle cell medium,SMCM):DMEM 添加 20 % FBS,100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素)。

    12. 将组织块放入湿润的培养箱,在 37°C 和 10% CO2 条件下孵育。

    13. 第 2 天加入 5 ml SMCM,注意勿让组织块去附着。

    14. 将组织块继续孵育 10 d。此后,平滑肌细胞从组织块迁移出来,并变为单层。

    15. 细胞生长接近形成单层时,用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液传代。


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