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    配制培养基时,葡萄糖和谷氨酰氨的使用

    发布时间: 2023-01-03  点击次数: 132次

        葡萄糖在生物学领域具有重要地位,是活细胞的能量来源和新陈代谢中间产物,为生物的主要供能物质,所以在培养细胞中,一般的细胞都会选择高糖的培养基来促进细胞体外生长。

     

        在目前常用的培养基中,葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源,其能量代谢通路与体内完-全不同,表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量,谷胺酰胺大部分通过不完-全氧化途径,另一小部分通过完-全氧化为细胞供能。因此,他们能调整细胞内的代谢途径,促进细胞的快速生长和产物合成,同时减少代谢抑制物的生成。

        L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,它的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完-全降解。


        葡萄糖主要通过糖酵解和柠檬酸循环两个酶系结构共同分解葡萄糖提供生理活动所需要的能量和细胞结构组成的小分子,并且能够在组织细胞内起到维持渗透压的作用,如果葡萄糖过多,那么会通过不同过程变成脂肪或蛋白质。



    葡萄糖和L-谷氨酰胺在培养基中浓度

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        谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用,合成培养基中都要添加,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解,4℃下放置7天即可分解约50%,所以都是在使用前添加。配制好的培养液(含谷氨酰胺)在4℃放置2周以上时,要重新加入原来量的谷氨酰胺,故需单独配制谷氨酰胺,以便临时加入培养液内。谷氨酰胺使用终浓度为0.002mol/L。一般配制为100倍浓缩液,即浓度为200mmol/L29.22g/L),配制时应加温30℃,完-全溶解后过滤除菌,分装至小瓶,储存于-20℃。使用时,在每100ml培养液中加入0.5~2ml谷氨酰胺浓缩液,终浓度为1~4mmol/L即可。


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