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    怎么使用GSIS方法检测细胞胰岛素分泌

    发布时间: 2023-01-04  点击次数: 120次

    Min6细胞是这次赠送活动中很多客户选择的细胞,一共送出去有50多株,随之而来的就是问胰岛素的检测,很多客户检测出来只有低表达。


    Min6细胞培养需要注意三点:

    1.细胞易聚团,消化的时间表面上看会非常短暂,大约30秒会全部脱落,脱落后请延长消化时间到2分钟后,再中和,细胞后期聚团会减少。

    2.活细胞运输的时候会漂浮,请收集培养基离心,离心后重新铺板以完-全培养基刚没过细胞为准,完-全培养基加太多会导致细胞浮力过大,贴壁不上。

    3.培养基请一定要加0.05mm的β-Mer


    以下是我们检测使用的buffer和protocol,步骤不能少,一步一步的来。


    Buffer的配制:

    NaCl 114mM, KCl 4.7mM, KH2PO4 1.2mM, MgSO4-7H2O 1.16mM, NaHCO3 25.5mM, CaCl2 2.5mM, HEPES 20mM, 0.2% BSA --> pH 7.2-7.5(一定要控制PH值范围)


    操作步骤:以2mM glucose 和25mM glucose 为例:

    细胞铺板每孔大约2000个细胞,铺板前三天左右脱抗生素采用灭活血清+β-Mer培养1640+10%FBS(灭活)+0.05mm β-Mer;在96孔板中培养24小时,然后将培养基改为含2mM葡萄糖培养基过夜。

    1.去除培养基,1 x PBS清洗细胞5分钟

    2.基础缓冲液(2mM 葡萄糖) ,2小时孵育 -- > 培养

    3.去除上清液 -- > 1 x pbs 清洗,请注意不要触碰底面

    4.葡萄糖刺激(2mM ) ,1小时孵育

    5.收获上清液 -- > 1 x pbs 清洗,请注意不要触碰底面

    6.葡萄糖刺激(2mM ) ,1小时孵育;

    7.收获上清液 -- > 1 x pbs 清洗,请注意不要触碰底面

    8.上清液取样 -- > 1500转,5 min,4度;

    9.细胞裂解---- > 蛋白质定量---- > 上机


    以下为检测结果:

    注意点:

    为了确保细胞分泌的胰岛素混合到上清液样本中,可以在培养期间在100-300转的平板振荡器上轻轻搅动细胞。


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    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。

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