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    收到活细胞怎么处理?

    发布时间: 2023-01-04  点击次数: 105次

     收到细胞后,发现是培养瓶,第一次操作的束手无策,怎么办?

     

    首先我们得弄明白我们得细胞是贴壁细胞还是悬浮细胞或者是半悬浮细胞,不明白的同学可以参考下图哦:




     

    贴壁细胞:SKOV3

     

     

     

     

    悬浮细胞:THP-1

    半悬浮半贴壁:BV-2细胞

     

    贴壁细胞请遵守以下准则:

    细胞收到后,显微镜下观察,有些细胞贴壁比较牢,它不会因为运输问题有变化,收到后下显微镜下观察细胞的密度,确定无污染,细胞无异常先放培养箱稳定1-2个小时后,按照贴壁细胞消化顺序消化:
    一. 贴壁细胞消化顺序如下:

    1.准备工作,胰酶预热,培养基预热,PBS预热10-15分钟
    1. 去上清,先用PBS清洗两次

    2.弃PBS后,加入1ml胰酶,前后左右轻轻摇匀后,超净台常温放置3-5分钟左右

    3.显微镜下观察细胞,若细胞变得椭圆透亮后,轻拍细胞瓶壁;

    4.显微镜下观察细胞是否已经脱落,要是没有脱落继续消化2分钟后再轻轻拍打,95%以上细胞脱落请立即加入含有血清的培养基终止消化。

    5.将消化下来的细胞悬液移入离心管离心,正常离心转速:1000-1200转,5分钟

    6.分瓶,第一次传代建议1:2传,或者传代一瓶,冻存一支。

     

     

    二.悬浮细胞传代规则:
    1,收到细胞后稳定一小时后,分两个50ml的离心管对等离心1000转5分钟;

    2.  弃上清,一管分2个T25瓶传代,一管冻存

    悬浮细胞传代不需要每次都离心操作,建议每传代2次离心操作一次,以去除细胞中的碎片

     

     

     

    三.半悬浮半贴壁细胞消化要领:1.收到细胞稳定一小时后,悬浮细胞收集离心,贴壁细胞按照贴壁顺序来消化即可

     

     

    收到细胞请一定要仔细阅读说明书,按照传代步骤操作,请保持和商家一样的培养方式,比如说,牛是吃草的,你想改善它的营养,也只能把草的质量提高,千万不能换成肉啊 ,不只贵还会把牛饿死。


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