小鼠胚胎MEF细胞的提取

小鼠胚胎MEF细胞的提取步骤：

1.将新鲜收获的胚胎放入10厘米的细胞培养皿中

2.用PBSA覆盖胚胎，取出胎盘和其他母体组织

3.切掉头顶（眼睛及以上），取出内脏

4.保存头部/卵黄囊进行DNA分离以进行基因分型检测

5.将胚胎体置于单独的10厘米板中

6.加入1mL胰蛋白酶，用刀片切碎成1mm的小碎片

7.用酒精灯火焰对样品之间的刀片进行消毒

8.将皿置于37°C培养箱中30-45分钟（倾斜，使胰蛋白酶覆盖细胞）

9.通过在每口井中添加4mL MEF培养基（通常DMEM+10%FBS+1%G/A）来抑制typsin活性。

10.用移液管10-20x吹打分离组织

11将细胞悬浮液转移到T75烧瓶或10cm平板上，并添加6-15mL MEF培养基

12.让细胞生长融合（3-4天）

13.抽出培养基，用10mL PBS冲洗

14.加入3mL胰蛋白酶，在37°C培养箱中培养5-10min

15.加入7mL MEF培养基进行中和

16.用移液管吸至离心管离心，使细胞重新悬浮

17.将悬浮液转移到2个T175烧瓶中，并向每个培养瓶中添加50mL MEF培养基

18.让细胞生长融合（3-4天）

19通过胰蛋白酶消化收获细胞，冷冻细胞@3x106细胞/瓶，注意冷冻不能密度太稀，此细胞冻存后复苏的存活会大量减少。

备注：1.在细胞培养房中执行细胞分离，并注意无菌操作，

2. 建议使用含有血清的冻存液冻存。

3. 原代分离培养请使用庆大霉素/两性霉素溶液来防止细胞污染发生。

以上就是本期的内容，更多资讯，欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯。

安培生物科技有限公司介绍：

安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户，提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂；inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产，包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等，为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务；提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务，努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。