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    细胞活性测定方法大全

    发布时间: 2023-01-10  点击次数: 110次

    代谢增殖测定



    MTT检测法

    活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使额外添加的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan),并沉积在细胞中,死细胞则无此现象。接着用二甲基亚砜(DMSO)溶解沉积在细胞中的甲瓒后,可利用酶标仪490nm波长测光吸收值,依据吸光值(OD值)计算出活细胞数量。在一定细胞数范围内,吸光值与细胞活性成正比。

    △ 图例



    XTT检测法

    与MTT原理相似,皆是利用添加物与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶反应,并利用酶标仪测定产物光吸收值;不同于MTT法的是,XTT法还原产物是水溶性的橙黄色甲肷,不需经过二甲基亚砜(DMSO)溶解步骤,即可直接测定光吸收值,操作较MTT方便快速。当XTT与电子耦合剂作用后产生的水溶性甲肷吸光值与活细胞数成正比。

    △ 图例



    DNA合成增殖实验


    BrdU检测法

    BrdU为胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,可用于标记活细胞中新合成的DNA(细胞活性周期S期),BrdU可随着DNA复制进入子细胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记,可通过抗BrdU单克隆抗体检测,借此检测细胞的增殖能力,但BrdU单克隆抗体检测过程需要将部分DNA变性,使部分双股解开成单股才能顺利检测。且BrdU为光敏性,因此需要在光线刺激较低(黑暗)的环境下操作,并避光培养。

    △ 图例



    EdU检测法

    EdU原理跟BrdU检测法很像,都是代替胸腺嘧啶(Thymine,T)渗入正在复制的DNA中,并加入能与EdU反应的荧光染料,即可利用检测荧光值侦测细胞增殖,或在细胞组织级别作为标记追踪等研究,实验过程不需要经过BrdU检测法的DNA变性处理。

    △ 图例


    化学发光细胞活性测定


    ATP发光法

    ATP是细胞的能量直接来源,ATP发光法是通过检测细胞内ATP含量来分析细胞增殖。市面上的原理是利用外源的萤火虫荧光素(Luciferin)与荧光素酶(Luciferase),以细胞内含的ATP为能量来源,发生氧化反应产生生物冷光,因此可通过监测冷光光度,来对应ATP含量并判断细胞增殖状况。

    △ 图例



    荧光染料增殖实验


    CFSE检测法

    CFSE是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有细胞膜通透性,能够自由进入细胞;当CFSE扩散穿过细胞膜,会与细胞内源酯酶产生水解反应而被激发,发出绿色荧光,这些带荧光的CFSE会进一步与细胞骨架蛋白结合,形成稳定的胞内荧光蛋白。每当细胞进行分裂增殖,胞内荧光蛋白会被平均分配到下一代细胞中,因此细胞荧光强度会随着增殖代数增加而不断地降低,可用流式细胞仪进一步检测分析得出细胞分裂增殖的情况。CFSE的浓度,对于最终判断细胞增殖结果有直接性的影响。

    △ 图例



    台盼蓝细胞计数


    台盼蓝(Trypan Blue)计数法

    台盼蓝是一种蓝色细胞活性染料,无法通过结构完整的细胞膜进入细胞内部;但细胞死后,丧失细胞膜稳定性,台盼蓝会进入细胞将细胞染成蓝色,因此在细胞实验中,常规地搭配自动细胞计数仪或血球计数板,应用于分辨活细胞和死细胞、及检测细胞膜的完整性。

    △ 图例



    Orangu™细胞计数


    Orangu™计数法

    Orangu™ solution是一种无细胞毒性、高灵敏度、比色法,用于测定细胞增殖和细胞毒性的细胞活性试剂。利用WST-8(细胞代谢的一种水溶性的四唑盐)在细胞内线粒体脱氢酶作为电子介质的情况下,它被还原为橙色的甲瓒染料,且产生甲瓒染料的数量与活细胞的数量和培养时间成正比。操作简单快速,结果可重复。

    △ 图例



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