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    血清沉淀知多少

    发布时间: 2023-01-10  点击次数: 99次

    血清沉淀是什么?

    血清中经常会出现肉眼可见的沉淀,其成分有多种类型,产生的原因有很多,主要有纤维蛋白、磷酸钙还有一些其它成分。

    1. 纤维蛋白(Fibrin)

    血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中,血清采集、过滤(3 次 0.1 μm过滤)和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原(Fibrinogen)处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

    2. 磷酸钙(Calcium Phosphate)

    这是一种常见的沉淀成分,通常会造成血清出现云雾状浑浊。当产品在 37℃保存时,这种现象尤其明显,在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动,常被误认为是微生物污染。

    3. 其他成分(Other) 

    血清中的其他成分也会形成沉淀,例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。


    血清沉淀会影响细胞培养吗?

    1. 细胞生长

    我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试,确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明,其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多客户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

    2. 怀疑污染

    磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下,当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时,常将其存放在 4℃冰箱中观察,并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多,反而会使血清更加浑浊,进而误以为存在血清污染。并且,在倒置显微镜下,可在血清中观察到四处游动的小黑点(磷酸钙颗粒的布朗运动),更容易使人误以为存在微生物污染。


    为防止这类误解的产生,我们不建议客户培养血清来验证是否存在污染,而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养,以观察是否有细菌的增殖。并且,进行革兰氏染色,并在油镜(100 X 10 倍)下观察可直接确认是否存在微生物污染。

    怎样操作可以尽量避免沉淀出现?

    1. 正确解冻

    首先,应按照逐步解冻的方式正确解冻血清:从-20℃取出后,置于 4℃冰箱缓慢解冻,最后置于室温完成解冻。如果直接从-20℃拿到室温或 37 ℃水浴解冻,则非常容易产生沉淀。在解冻过程中,请注意时不时缓慢摇晃瓶子,减少沉淀的产生。为避免反复冻融,建议您将血清分装使用。

    2. 使用和保存注意事项

    血清沉淀很难预测和避免,出现沉淀后也无需担忧,这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能:

    1) 热灭活;

    2) 37℃培养;

    3) 反复冻融;

    4) 伽马射线照射; 

    5) 2-8℃长期保存; 

    6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中(温度不稳定)。

    血清沉淀的形成机理多种多样,具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象,这一点可以在各品牌网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。


    出现血清沉淀该如何处理?

    若想去除沉淀,我们建议您采用2000 rpm 离心5分钟,或用0.45 μm的过滤器去除沉淀。

    总结:

    血清产品中出现沉淀于常见现象,无需过多担心,并且不会响血清的品质,对细胞培养而言也是没有任何问题的,大家可以放心使用。


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