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    Nunc细胞工厂

    发布时间: 2023-01-11  点击次数: 79次

    原理

    用培养液制备细胞悬液,将悬液注入单元的各小室内。使长边朝下,放置。将单元旋转 90度,放平后用 CO2 充气。然后封闭,进行培养。

    材料与仪器

    单层细胞 0.25%天然胰蛋白酶 D-PBSA
    生长培养液
    Nunc细胞工厂 硅酮管和连接器 血细胞计数板或电子细胞计数器和计数用液体

    步骤

    1. 用胰蛋白酶消化后,将细胞悬浮,计数细胞,用 2 L 培养液将悬液稀释至细胞密度为 2x104 个/ml。

    2. 使小室长边朝下,放置,将培养液供应管与 Luer 连接管相接,再通过供应管与底孔连通。

    3. 经供应管加入细胞和培养液。所有培养小室内的液体将达到相同水平。

    4. 按单层细胞平面将小室转动 90度,使单元的短边朝下,放置,使进孔和供应管朝上。

    5. 在 Luer 连接管处,中断供应管与培养液储存器的连接。

    6. 与细胞单层平面垂直,将培养小室转动 90度,以底部放平,使培养面呈水平位。

    7. 用 5% CO2 空气向单元充气 5 min,然后夹住供应管和出口。如果需要,可连续充气。

    8. 倒掉供应管和出口内的培养液,然后将单元移入培养箱。

    9. 更换培养液(或收集培养液)时,按步骤 6 的相反程序操作。除去输入管上的滤器,然后按步骤 4 相反程序操作。

    10. 擦洗 Luer 连接管,松开夹具,使培养液流出。

    11. 按步骤 2~8 更换培养液。

    12. 收集细胞。

    (a)按步骤 9 和步骤 10 除去培养液。

    (b)加入 500 ml D-PBSA,然后除去。

    (c)加入 4℃的 500 ml 胰蛋白酶,30 s 后除去。

    (d)用剩余的胰蛋白酶将细胞消化 15 min。

    (e)加入培养液,摇动培养小室,使细胞悬浮。

    (f)按步骤 9 和步骤 10 取出含细胞的培养液。

    13. 残留细胞可用于接种下一批细胞,虽然这种方法难以控制接种密度。最好是将培养小室丢弃,用新的小室重新开始培养。


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