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    叶绿体被膜完整性的测定

    发布时间: 2023-01-16  点击次数: 59次

    原理

    由于玻璃氰-化-钾不能透过被膜,故完整叶绿体在等渗介质中不能进行玻璃氰-化-钾光还原的Hill反应。而失去完整被膜的叶绿体,铁氰-化-钾可以进入类囊体进行Hill反应。根据这一原理,比较胀破与未胀破的叶绿体Hill反应速率,就可计算叶绿体被膜的完整度。

    材料与仪器

    植物材料
    铁氰-化-钾 NH4Cl
    氧电极测氧全套装置 烧杯 微量进样器 洗耳球

    步骤

    1. 取0.1ml叶绿体提取液加到0.9ml的蒸馏水中并搅拌1min,使叶绿体被膜胀破,加1ml测定介质Ⅰ悬浮备用。


    2. 取0.1ml未胀破叶绿体提取液加入反应杯中,视反应杯体积加入测定介质Ⅱ,加入适量铁氰-化-钾和NH4Cl,使铁氰-化-钾和NH4Cl的最终浓度都为1mmol/L。搅拌,平衡1min,照光测定Hill反应放氧速率,记录5min,然后清洗反应杯。


    3. 将已胀破叶绿体加入反应杯中,再加入适量测定介质Ⅱ、铁氰-化-钾和NH4Cl,使反应体系物质最终浓度同未胀破叶绿体测定体系,测定过程同2。


    4. 分别计算胀破和未胀破的叶绿体测定体系中单位时间的放氧量(或Hill反应速率)。


    5. 计算被膜完整度。

    注意事项

    1. 本实验所用玻璃要存放在冰箱中,存放时间不宜过长,最好现配现用。


    2. 叶绿体的分离要在0~4℃下进行,玻璃器皿和溶液都须预冷,操作要快,整个分离过程最好在5min内完成。


    3. 离心过程中离心机的转速不宜过高,否则叶绿体中的淀粉粒会打破叶绿体被膜。


    4. 被膜完整度的测定过程中,反应杯内破碎叶绿体与完整叶绿体的叶绿素含量应相等。

    常见问题

    叶绿体的外膜和内膜合称为被膜。叶绿体的外膜和内膜都是连续的单位膜, 每层膜的厚度为6~8nm, 内外两膜间有10~20nm宽的间隙, 称为膜间隙。与线粒体不同的是,叶绿体的内膜并不向内折成嵴, 但在某些植物中,内膜可皱折形成相互连接的泡状或管状结构,称为周质网(peripheral reticulum),这种结构的形成可增加内膜的表面积。


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