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    细胞伤口愈合

    发布时间: 2023-01-16  点击次数: 47次

    原理

    在单层培养细胞间制作划痕以产生愈伤区域,然后监控该伤口周围细胞的向划痕迁移的现象,即伤口愈合。改变细胞迁移和/或生长的因素可以增加或降低伤口愈合率。该方法可以定量,适用于自动化系统高通量筛选。

    材料与仪器

    人MDA-MB-231细胞
    DMEM培养基 胎牛血清 PBS 戊二醛 乙醇 结晶紫
    24孔培养板 枪头 细胞培养仪

    步骤

    1.细胞在含有10%FBS的DMEM培养基中生长。


    2.细胞以一定密度接种到24孔细胞培养板中,生长24小时后,单层细胞融合度应达到70-80%。


    3.不要更换培养基。用新的1ml枪头轻轻的在单层培养细胞间划痕,划痕横穿过孔,枪头尽量与板孔的底部垂直,不要倾斜。这样产生的gap的距离才与枪头末端的外直径相等。Gap的距离可以选用不同型号的枪头调节。划痕在同一方向成一条直线。


    4.在垂直与第一条划痕的方向制作另一条划痕,每孔划痕成十字交叉型。


    5.划痕后,用培养基轻轻的清洗板孔2次,以去除脱落细胞。


    6.每孔添加新鲜培养基。


    7.(培养基中含有某些成分,如抑制/促进细胞迁移和/或增殖的化学物质)


    8.细胞生长48小时(或根据时间需要)。


    9. 1xPBS清洗细胞两次,然后使用3.7%多聚甲醛固定30分钟。


    10. 1%的结晶紫(2%乙醇溶解)染色30分钟。

    注意事项

    为了降低实验结果的可变性,建议每孔选择多个视野观察,每组做多个重复。

    常见问题

    gap的距离可通过Photoshop或ImagJ软件测量,为了降低实验结果的可变性,建议每孔选择多个视野观察,每组做多个重复。


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