销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 植物原生质体的制备

    植物原生质体的制备

    发布时间: 2023-01-29  点击次数: 831次

    原理

    去掉植物细胞壁的方法可以是机械的人工操作,也可以利用酶解法。较早利用机械法制备原生质体的首-推Klercker(1892),直到1960 年英国科学家Cocking 才第一次用酶法大量制备原生质体。本实验以植物的叶肉组织为材料,利用纤维素酶和果胶酶来消化细胞壁,分离细胞。

    材料与仪器

    油菜或菠菜或烟草
    氯化钙 蒸馏水 2蔗糖 酶解液
    显微镜 离心机 离心管 剪刀 镊子 吸管 培养皿 载玻片 盖玻片

    步骤

    1、取材 根据实验目的和条件选取不同的材料

     

    2、分离原生质体

     

    (1) 撕叶下表皮

     

    (2)酶解 将撕去下表皮的叶片剪成小块,放在盛有5mL 酶液的小培养皿中,让去除下表皮的一面接触酶液,辅满一层,在25——28℃下酶解60——90 分钟

     

    3、收集纯化

     

    (1)用吸管将酶解液吸至5mL 离心管中,以600rpm 离心5 分钟以上,使原生质体沉降

     

    (2)将上清(酶解液)回收,剩下原生质体及残渣于管底

     

    (3)加氯化钙液约2mL,轻轻吹打均匀

     

    (4)用注射器向离心管底部缓缓注入蔗糖约2—3mL,出现下部蔗糖液,上部原生质体悬浮液

     

    (5)以600rpm 离心10 分钟,在两液相之间出现一条绿色带,便是纯净的原生质体

     

    4、观察或培养

     

    取少许原生质体于载片上,盖片观察其形态,或者将原生质体接种在培养基上进行培养,再生植株。

    注意事项

    要培养悬浮细胞系需较长时间。因此,应着重改善培养条件,主要包括选用合适 的培养基 包括培养基 种类 、添加物 、激素种类及水平等 及培养方式 根 据培养物状态适时改换适宜培养基 选择合适的外植体及诱导时期 。

    常见问题

    原生质体是裸露的、具有生命活性的细胞,体内包裹着细胞核、细胞器、细胞质等, 因此原生质体具有再生细胞壁、进行连续分裂并生成完整植株的能力 , 即具有细胞全*性。原生质 体能 摄 人 如 DNA、质粒 、病毒 、细菌 、细胞器等外源物质 , 是植物细胞工程进行遗传操作 、基因转移的良好材料 。

     

    以上就是本期的内容,更多资讯,欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯

     

    安培生物科技有限公司介绍:

    安培生物坚持为生命科学研究、活体动物转染、大规模生物生产、基因和细胞治疗领域客户,提供*细胞体内可代谢的核酸转染试剂;inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品旨在支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;提供以植物生物为平台基因序列全人源化、*的细胞培养可分解3D基质胶产品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、对细胞无毒性影响、高纯度的一型胶原蛋白产品。安培生物专注为生物医药领域提供优质的产品和技术服务,努力发展为基因治疗、细胞治疗的生物科技企业。

     

产品中心 Products