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    H1人胚胎干细胞培养常见问题

    发布时间: 2023-02-24  点击次数: 619次

    疑难解答

    是否还需要往H1细胞专用培养基中补充或添加成分?

    不需要。H1细胞培养基中各个成分的质量和浓度都经过了优化实验,支持人ESC/iPSC的长期培养,无需再自行添加。

    培养基中有沉淀状物质是否是质量问题?

    添加剂在解冻过程中,若有少量沉淀析出,属于正常现象,不影响使用,请充分混匀后与基础培养基混合。但添加剂不能在37℃解冻,否则会析出大量沉淀,影响培养基的效价。如果培养基中出现大量沉淀,请不要使用。

    •是否能在37 ℃反复水浴H1细胞专用培养基?

    不能。频繁地在4℃和37℃之间转换会导致H1细胞专用培养基中含有的因子失活,H1细胞专用培养基在使用前平衡至室温即可。

    • H1细胞在传代后不贴壁怎么解决?

    造成H1传代后不贴壁的最可能的原因:

    ① 细胞消化时间不合适;②消化后吹打次数不合适,使得完成传代后细胞集落过大或过小。

    • H1分化怎么处理?

    ① 细胞在刚复苏或传代时,小的细胞团不呈现标准的克隆形态,培养几天或传代后可恢复。②如果H1分化的表现为干细胞克隆形态良好,克隆周边出现散在的分化细胞,可通过高比例传代(≥1:10),使得分化细胞的密度减少,低密度的分化细胞可被H1培养体系筛选去除,如未全去除,可用细胞刮或巴斯德管刮除。

    ② 如果H1分化的表现为克隆内部松散,边缘不平滑,在分化比例小或分化不严重的情况下,可通过连续传代2 ~ 3次恢复,如果分化严重,建议弃除。

    • 细胞复苏率低是什么原因?

    细胞复苏需使用H1细胞复苏培养基,可大大提高细胞的复苏效率。复苏过程中,转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时,吹打力度要轻柔,并尽量减少吹打次数,细胞接种后,即刻在显微镜下观察细胞团块的大小,4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多,导致细胞分散成单细胞,细胞复苏率将偏低。


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