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免疫组织化染色

发布时间： 2023-04-10　　点击次数： 486次

材料与仪器
新鲜组织
二甲苯酒精 H2O2 抗原修复液枸橼酸钠缓冲液石蜡福尔马林 PBS DAB 苏木素树胶丙酮打孔液柠檬酸钠 APES
恒温摇床高压锅塑料切片架耐温玻璃容器 -80℃冰箱恒冷冰冻切片机载玻片
步骤
一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤：
1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置60℃ 1 小时）。
（1）二甲苯I、II,各10 分钟。
（2）梯度酒精：100%，2 分钟® 95%，2 分钟® 80%，2 分钟® 70%2 分钟。
（3）蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。
2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2O2，室温10 分钟（避光）。
3．蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。
4．抗原修复：
根据待检测的抗原，选择适当的方法。
附：抗原修复液（10mM pH 6.0 枸橼酸钠缓冲液）的配制
（1）储备液的配制：
A 液：枸橼酸三钠-2H2O 29.41g + 蒸馏水1000ml
B 液：枸橼酸21g + 蒸馏水1000ml
（2）工作液的配制：A 液82ml + B 液18ml + 蒸馏水900ml
抗原修复的方法：
（1）高压锅处理技术：枸橼酸钠缓冲液（10mM，PH6.0）,淹没切片,盖上锅盖，高压锅内煮沸,上汽3 分钟后缓慢冷却（可用自来水在高压锅外冲，以助冷却）。
（2）微波处理技术:用塑料切片架,置于塑料或耐温玻璃容器内，枸橼酸钠缓冲液淹没切片，选择中高或高档,5 分钟;取出并补充已预热的枸橼酸钠缓冲液；再选择中高或高档,5 分钟（. 最佳温度为92～95℃）
（3）酶消化处理：此略。
抗原修复的注意事项：
（1）组织不能干。
（2）选择抗原修复方法要因抗体而异。
（3）该方法主要用于10%福尔马林固定、石蜡包埋组织。
（4）抗原修复后至DAB 显色的过程中，均需用PBS 缓冲液。
5．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床）。
6．正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分（保持组织呈湿润状态）,滴加正常山羊或兔血清（与第二抗体同源动物血清）处理，37℃，15 分钟。

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