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    兔多克隆抗血清的制备

    发布时间: 2023-04-12  点击次数: 720次

    材料与仪器

    抗原
    PBS 乙醇
    注射针头 注射器 培养箱

    步骤

    1. 取2 ml 的弗氏完-全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中,使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液,接上22G注射针头,排出注射器中的气泡。
    2. 将兔子敢在固定架上,用一只手抓住兔的颈背部毛皮,另一只手托住兔的后腿及臀部,将兔束紧固定以使后肢不能伸张,用70%乙醇对所要注射的区域进行清洁消毒,在后肢大腿肌肉内进针约1 cm 深,毎条大腿肌肉内最多注射0.5 ml 乳化液。
    3. 四周后,用1 mg 的混溶干弗氏不完-全佐剂的抗原乳化液(1:1)对兔进行肌肉内加强免疫注射,操作步骤同1和2,初次加强免疫后2周再次进行加強免疫注射。

    4. 第二次加强免疫注射10天后,从兔的耳缘静脉处放血。

    (1)先将兔固定在固定架上(固定紧),使其耳朵伸出,用70%乙醇洗洁消毒一侧耳朵。

    (2)将兔耳置于热灯之下,用手指轻轻地拍打兔耳;1~2 min 内兔耳上的血管即会充分地充盈。

    (3)用一消毒过的解剖刀 的锋尖在兔耳缘静脉上迅速划一长约0.5 cm 的小口,收集兔血于50 ml 的塑料离心管中,直至伤口不再流血为止。

    (4)使兔血顺管壁下落,以避免发生溶血。
    5. 将兔耳擦拭干净,涂以70%乙醇,在耳朵伤口上涂一层凡士林,以减轻由乙醇产生的皮肤刺激感。
    6. 将兔血在室温下静置数小时后置4 ℃过夜,用一木质的拨棒将血凝块轻轻地挑松并使之由离心管的侧壁脱落,将血洧移到合适的离心管中,5 000 g 离心10 min,去除残留的红细胞及其他碎片。
    7. 每两星期进行进一步的加强免疫。每次加强免疫后10天,可采集一次兔血,兔的两只耳朵可轮流交替进行采血。

    8. 采用ELISA法或RIA法对血清中的特异性抗体进行滴度测定。如果需要的话。


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