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B 淋巴细胞膜表面免疫球蛋白的检查
发布时间： 2023-04-12 点击次数： 515次原理
SmIg 是B 细胞的抗原识别受体，也是B 细胞特异的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig 抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig 抗体可以与B 细胞表面的Ig 结合，在荧光显微镜下观察可见B 细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B 淋巴细胞。材料与仪器
ICR 小鼠
异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig 抗体 Hank's液
台式离心机 离心管 吸管 移液管步骤
1. 采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出脾脏放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目钢网研磨，混匀。从中吸取1 ml细胞悬液放入一试管中，加满Hank's液，离心1000 rpm，10 分钟，洗涤细胞一遍。倾去上清，沉积的细胞恢复1 ml容积，即为约1x107/ml的细胞悬液。另取一支试管，吸取1x107/ml的细胞悬液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即为1x106/ml的细胞悬液。2. 取2 ml离心管两只，各加入1x106 /ml的细胞悬液1 ml，用台式离心机离心2000 rpm，3 分钟，弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100 ul，另一支不加抗体作对照，置4 ℃冰箱30 分钟。3. 取出离心管，用Hank's 液洗涤细胞两次，以去除游离的抗体，最后一次离心后弃去上清液，留少许回流液，混匀，滴片，用荧光显微镜观察。注意事项
一、在滴片前要去除游离的抗体，以避免假阳性结果。
常见问题
实验结果荧光显微镜观察，落射激发光下SmIg 阳性细胞可见环状或斑点状荧光。用钨丝灯光源透射光照明计数同一视野内淋巴细胞总数，共计数200～300 个淋巴细胞，算出其中SmIg 阳性细胞的百分数。深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技术实力、壹流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东，服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司，旨在为生命科学的发展提供壹流的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线，在各个领域内向用户提供世界前沿水平和质量稳定的产品，安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等优质客户提供优质的产品、技术支持与服务。
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