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    B 淋巴细胞膜表面免疫球蛋白的检查

    发布时间: 2023-04-12  点击次数: 535次

    原理

    SmIg 是B 细胞的抗原识别受体,也是B 细胞特异的表面标志,用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig 抗体,在一定条件下与淋巴细胞混合,荧光素标记的抗Ig 抗体可以与B 细胞表面的Ig 结合,在荧光显微镜下观察可见B 细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B 淋巴细胞。

    材料与仪器

    ICR 小鼠
    异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗小鼠Ig 抗体 Hank's液
    台式离心机 离心管 吸管 移液管

    步骤

    1. 采用颈椎脱臼法处死小鼠,解剖取出脾脏放入盛有6 ml Hank's液的平皿中,用100 目钢网研磨,混匀。从中吸取1 ml细胞悬液放入一试管中,加满Hank's液,离心1000 rpm,10 分钟,洗涤细胞一遍。倾去上清,沉积的细胞恢复1 ml容积,即为约1x107/ml的细胞悬液。另取一支试管,吸取1x107/ml的细胞悬液0.4 ml加Hank's液3.6 ml,即为1x106/ml的细胞悬液。
    2. 取2 ml离心管两只,各加入1x106 /ml的细胞悬液1 ml,用台式离心机离心2000 rpm,3 分钟,弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100 ul,另一支不加抗体作对照,置4 ℃冰箱30 分钟。
    3. 取出离心管,用Hank's 液洗涤细胞两次,以去除游离的抗体,最后一次离心后弃去上清液,留少许回流液,混匀,滴片,用荧光显微镜观察。

    注意事项

    一、在滴片前要去除游离的抗体,以避免假阳性结果。



    常见问题

    实验结果
    荧光显微镜观察,落射激发光下SmIg 阳性细胞可见环状或斑点状荧光。用钨丝灯光源透射光照明计数同一视野内淋巴细胞总数,共计数200~300 个淋巴细胞,算出其中SmIg 阳性细胞的百分数。


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