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    PCR 产物纯化

    发布时间: 2023-04-21  点击次数: 634次

    材料与仪器

    TE 或去离子水 PCR 产物
    离心机和转子 PCR 滤 件 微量离心管

    步骤

    一、材料

    1. 缓冲液和溶液

    TE(lOmmol/L Tris-HCl,lmmol/L EDTA,pH7.5) 或去离子水

    2. 核酸和寡核苷酸

    待测序的 PCR 产物

    3. 离心机和转子

    带有固定倾角转子的小型离心机,如 Eppemlorf5415C

    4. 特殊设备

    AmiconMicrocon-PCR 滤件(Millipore) 或者相当的产品,微董离心管或接收管

    二、方法

    1. 对每一个待纯化的 PCR 产物,都在接收管中放置一个滤件,滤件的储液面向上

    储液池中加入 400ul 去离子水或 TE,注意加样时不要触及膜。加入 100ulPCR 产物,避免带进矿物油。如果 PCR 产物不足 100ul, 用去离子水或 TE 补足,盖上盖子。

    2. 将 1 中所得组合体用带有固定倾角转子的离心机,l000 g 离心 15 min(例如,Eppendorf5415C 离心机上 3300r/min)。注意盖子和管的结合部朝向转子的中央。

    3. 移去滤件,将其放入一干净的收集管中,有膜面朝上(如果愿意,滤件可以一直

    存到样品分析结束)。在滤件上小心地加 20ul 去离子水或 TE,注意不要触及膜,然后将滤件反转过来,放回到干净的收集管中,使带有液体的一面朝下。

    4.1000 g 离心 2 min, 收集纯化的片段。


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