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DNA 复制需要哪些元素
发布时间： 2023-06-28 点击次数： 671次1) 需要脱氧核苷三磷酸：
进行 DNA 合成必须具备的 2 个关键底物之一，即 4 种脱氧核苷三磷酸——dGTP、dCTP、dATP、dTTP。通常商品化 PCR 酶会提供这 4 种脱氧核苷三磷酸的混合物 dNTP。2) 需要引物-模板接头：DNA 合成的第二个重要底物是一具有特定序列的双链 DNA，称为引物-模板接头，即指 导互补脱氧核苷酸添加的单链 DNA 模板和与模板互补但比模板短的一小段序列。较长的 DNA 链有一个与引物退火的区域和一个毗邻的单链 DNA 区，此区作为 DNA 合成的模板；较短的引物与较长的 DNA 链退火，且必须有与模板单链 DNA 区毗邻的游离 的 3’-OH，当新核苷酸加入时引物的 3’-OH 端得以延伸。一般而言，引物-模板接头的引物部分才是 DNA 合成的底物，而模板仅仅提供选择哪种核苷酸进行添加的必要信息。因此我们在设置 PCR 反应程序时第一步是高温变性（一般会设置成 95℃变性），就是为了把双链的模板变性成单链，第二步是降低温度，是为了让引物能互补匹配到单链模板上。
3) 需要 DNA 聚合酶：DNA 聚合酶的三维结构类似于一只右手。手掌域是催化活性位点，可以催化任意 4 种脱氧核苷三磷酸的添加，这一区域结合 2 个二价金属离子（通常是 Mg2+或 Zn2+）。其中一个 金属离子降低 3’-OH 对其氢的亲和力，这会产生一个准备对引入 dNTP 上的 α-磷酸进行亲核 攻击的 3’O-。第二个金属离子与 dNTP 的 β-和 γ-磷酸负电荷协同作用，稳定由引物和引入核苷酸连接在一起时所产生的焦磷酸。所以我们在 PCR 时，反应体系里加入适量的 Mg2+是十分重要的，添加的量少导致 PCR 酶无法发挥最大活性，添加太多则降低酶反应的特异性。DNA 聚合酶是一种延伸酶，其催化是快速的。DNA 合成的速度主要取决于 DNA 聚合酶 的延伸能力。在实际应用中，一般的Taq酶的延伸速度大致是扩增产物在2kb以内是1kb/min。 扩增产物超过2kb 的部分可以以500bp/min 来计算。比如扩增2kb，延伸时间就设置成2min， 而扩增 3kb，就可以把延伸时间设置成 4min。也有延伸能力更强的酶，那么延伸时间就按产 品说明书描述的来设置。深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技术实力、壹流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东，服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司，旨在为生命科学的发展提供壹流的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线，在各个领域内向用户提供世界前沿水平和质量稳定的产品，安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等优质客户提供优质的产品、技术支持与服务。
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