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    吐温20在WB中的作用是什么?

    发布时间: 2024-03-20  点击次数: 2889次

      Western blot 实验中常用的洗液 TBST 是一种实验室配制液体,其配方大体相似,其中一种组成成分是 Tween-20,它是一种黄色或琥珀色的透明油状液体,有特殊的气味和轻微的苦味。使用移液器吸取时会感觉到一种滞后感。


       Tween-20 ,也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate,中文名为吐温-20或吐温20。为非离子型表面活性剂,大白话就是:它的作用就是洗掉非特异性结合的蛋白质。其在 Western blot 实验里的作用原理如下:它可以通过降低溶液表面张力,使抗体更容易扩散并结合到膜上的目标蛋白,同时减少非特异性结合,从而提高检测的特异性和信噪比。


       在WB洗液里的吐温是和BSA一样,对抗原抗体蛋白提供保护作用,同时因为是表面活性剂(司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物),可以减少抗体对抗原的非特异性作用,用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。
       如果抗体浓度过高或封闭不充分导致背景过高,可以通过降低抗体稀释度、增加洗膜次数和Buffer用量,或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20来改善。

       虽然 WB 是一类基础实验,但是基础并不代表简单。翻车的主要原因在于 WB 的步骤实在繁琐:从配置蛋白胶开始,到蛋白电泳、蛋白转膜、抗体孵育,一整套流程下来花费 1~2 天的时间才能进行最后的显影。这些环节中但凡有一个出错,就会导致实验的失败。

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