销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > PCR凝胶电泳问题,全都总结出来了!

    PCR凝胶电泳问题,全都总结出来了!

    发布时间: 2024-05-31  点击次数: 639次

    1.Marker相关问题

    1.1Marker 不直,偏斜或拖尾

    原因:

    1.胶配制的问题,制作不均匀或有污染或琼脂糖质量不好;

    2.电泳缓冲液过于老旧,考虑更换;

    3.电压太高,凝胶受热导致不均匀;

    4.电泳槽的电极歪斜;


    1.2Maker 跑不开

    原因:

    1.胶浓度太大;

    2.电泳时间太短;


    2.PCR产物相关问题

    2.1没条带

    原因:

    没跑出来


    2.2条带微弱

    原因:

    1.DNA降解

    2.上样量过少

    3.没跑出来,产物浓度过低,需再次PCR


    2.3非特异性扩增

    原因:

    1.引物设计不合理。需重新设计引物,balst检测引物特异性;

    2.试剂被污染。包括水,酶,引物等。重新更换;

    3.退火温度太高。提高退火温度,增加退火时间,减少循环数;

    4.酶加入过多;


    2.4 PCR产物弥散,拖尾或偏斜,Maker正常

    原因:

    1. 引物保存不当,降解。重新配制引物工作液。

    2.模板降解或过量。重新检查模板质量,减少模板用量。

    3.非特异性扩增。提高退火温度,增加退火时间,减少循环数。

    4.酶量过多或酶的质量差。

    5. 有蛋白和盐的污染。


    2.5 PCR产物和Maker 都弥散或拖尾

    原因:

    1.胶配制的问题,制作不均匀或有污染或琼脂糖质量不好;

    2.电泳缓冲液过于老旧,考虑更换。

    3.电压太高,凝胶受热导致不均匀。


    2.6 PCR产物与目的大小不符合

    原因:

    1.引物特异性不好。需重新设计引物,balst检测引物特异性。

    2.存在新的异构体。

    3.是目的基因,但大小有差异(我遇到过)。胶回收过后再次电泳条带变为正常大小。遇到这个情况可以测序看看结果。


    2.7 电泳孔亮

    原因:有蛋白或者多糖的污染,这些大分子物质影响了DNA或RNA的出孔,使其停留在孔中或者出孔很慢。导致孔以及接近孔的位置很亮。

    以上就是本期的内容,更多资讯,欢迎点击安培生物网站链接了解更多技术与产品资讯

    安培生物致力成为推动生命科学进步值得信赖的合作者

    深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东,服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,旨在为生命科学的发展提供较好的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线,在各个领域内向用户提供较高的水平和质量稳定的产品,安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等客户提供各种产品、技术支持与服务。


    可以在第一时间为用户提供比较先进的专业资讯和完备的产品和物流服务。 专业的技术力量使得我们能够为广大用户提供强大的技术支持,深厚的人脉资源使得我们在全国主要城市拥有众多的合作伙伴,安培生物非常荣幸能将世界上先进的高科技产品推荐给国内从事生物学领域科研的老师和同仁。作为专业性的产品供应商,公司出资存备了大量现货,配合优秀的销售队伍以及专业的技术支持,随时为客户提供服务。






产品中心 Products