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    质粒电泳3条带?5条带?一文告诉你原因

    发布时间: 2024-06-04  点击次数: 281次

    1.相信很多小伙伴将质粒电泳后发现,质粒不是单一条带,而是出现了很多条带,例如下图:

                                       质粒电泳3条带?5条带?一文告诉你原因


    2.质粒为什么出现这样的情况?

    一般理解来说,质粒DNA应如图2(左)所示的简单环状结构。然而,双链环状DNA的分子轴变形或双螺旋的扭曲,导致闭合环状DNA中每个螺旋转弯的实际碱基对数量发生变化,或者导致螺旋轴发生规则的空间变形,产生拓扑结构,形成质粒DNA的超螺旋性状(图2右)。

    质粒电泳3条带?5条带?一文告诉你原因


    因此,不同的拓扑结构将使质粒DNA形成多种形式,包括共价封闭圆形(CCC)形式、开放圆形(OC)形式(也称为“缺口形式")和线性形式(通常通过奇特的限制性消化获得)。在CCC形式中,两条DNA链是共价闭合的,DNA是超螺旋的。这种亚型的结构最紧密。如果DNA断裂产生缺口,就会产生OC,卷曲也就消失了。当两条线在同一位置断裂时,就会产生线性形式。此外,质粒可能以寡聚体形式出现,例如串联体,而串联体又可能以不同的异构体形式存在。所有这些形式都可以通过琼脂糖凝胶电泳观察到。但出现多少种条带会根据你的质粒提取技术、质粒的新鲜程度、电泳液的配置以及琼脂糖凝胶的配置等有所不同。


    2.怎么区分质粒的电泳条带?

    一般来说,质粒迁移速度由快到慢分别是共价封闭原形(超螺旋)形式线性和开放圆环(开环)形式,并伴随着其他形式。原因是:电泳DNA迁移速率与分子大小和构象相关,分子构象越大,空间位阻阻力越大。超螺旋结构较为紧密,因此跑的快;开环质粒由于DNA断开,阻力增大,因此跑的最慢。


    3.怎么验证质粒是否可用?

    综上所述,质粒存在多少条带与多种因素相关,没有存在绝对的衡量标准。但如果用限制性内切酶消化质粒DNA,只会出现一条清晰的条带。并且,由于酶切形成线性化DNA片段,其电泳迁移速率会比对照组原始质粒的超螺旋结构速度慢,可以检验质粒是否被切开。


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