细胞培养新手答疑帖（内含污染、传代、复苏的问题&解析）

1.污染

Q：以下图片中的细胞是否已污染？这些小黑点，PBS冲洗能去掉大部分，但第二天会重新出现。

A：图中的细胞存在微生物污染，在细胞与细胞间隙之间，有大量的小黑点聚集，且形状基本上都是规则的颗粒状。

当使用PBS冲洗时，能洗掉大部分，但却无法全部清楚，因为只要残留极少量的微生物，还是会继续繁殖的。

从问题描述来看，PBS冲洗后第二天黑点就重新出现，凭这一点就可以辅助我们进行判断——这是微生物污染。如果PBS冲洗后，黑点不再出现，那么黑点可能只是培养物碎片/杂质，但如果会不断增加、无法全部清除，就肯定是污染。

有同学可能会疑惑，我不是在培养基中加了双抗么，为什么还会污染呢？

双抗，能抑制微生物增殖，但无法全部杀灭微生物。当污染达到一定程度后，双抗也就无法继续抑制它们的增殖，而随后，你就能在显微镜下看到微生物污染了。此时，双抗对微生物的影响已经失效。

对于上图的细胞，我们只能扔弃，避免其波及其他培养瓶内的细胞。

相应的，这里也贴出一张正常状态、没有微生物污染的细胞，在视野内细胞与细胞的间隙是很干净的，没有黑点、杆状、丝状物，细胞也基本上是完好无损的，没有解体的细胞。

2.传代

Q：以下图中的细胞状态正常吗？继续培养还是消化传代？

A：图中的细胞密度已经达到了100%，细胞与细胞之间已经没有任何空隙，所以我们看到这些细胞都挤成一堆了，它原本是什么形态的根本无法观察出来。

当细胞的密度达到100%时，细胞就会与周围的细胞全部贴合在一起，产生“接触抑制"，表现为停止增殖，随后就是细胞状态开始下滑——进入衰退。

如果拿这个状态的细胞去做实验，效果会受到影响。大家要尽量避免细胞长得太密才进行消化传代。以下是我们之前提供过的一张细胞密度示意图。一般来说，80%-90%的密度就可以消化了。

3.复苏

Q：以下图中的细胞是复苏后第二天的，细胞（贴壁生长的）还活着吗？

A：复苏后的细胞，如果是贴壁生长的，一般种入培养器皿后大约10-16小时就可以贴壁生长了。

解冻的过程也要尽快完成，可以尝试拿一个塑料薄膜手套装着冻存管，然后镊子夹住管子和薄膜手套部分，深入水中不断摇晃，观察到管内已经全是液体后，立即停止并尽快进入下一步操作。

以上就是本期答疑帖的全部内容，如果需要PBS、双抗溶液可以向我们咨询，欢迎关注安培生物科技有限公司了解更多技术与产品资讯。

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