细胞转染全过程及ZETA LIFE解决方案

1. 脂质体转染法操作（以 6 孔板为例）

稀释核酸和脂质体：分别取适量核酸和脂质体转染试剂，用 Opti - MEM 培养基稀释。一般而言，DNA 用量在 0.5 - 2μg，脂质体用量在 1 - 4μL，具体比例依试剂说明书和预实验优化。例如，某实验中，将 4μg 质粒用 200μl Opti - MEM 稀释为 A 液，10μl lipo2000 用 200μl Opti - MEM 稀释为 B 液。

混合孵育：将稀释后的核酸和脂质体轻轻混合，室温孵育 15 - 20 分钟，促使核酸和脂质体形成复合物。如上述例子，将 B 液加入 A 液中，轻轻混匀，室温静置 20 分钟。

更换培养基：吸除培养细胞的原培养基，用无血清培养基或 Opti - MEM 培养基轻柔洗涤细胞 1 - 2 次，然后添加适量无血清培养基。

加入转染复合物：将孵育好的核酸 - 脂质体复合物缓慢加入培养孔，轻轻晃动培养板，使复合物均匀分布于细胞表面。

培养：将细胞置于 37℃、5% CO₂培养箱继续培养，4 - 6 小时后更换为（血清）细胞培养基，维持细胞正常生长。

2. 电穿孔转染法操作

细胞准备：收集对数生长期细胞，用 PBS 洗涤后，使用电转缓冲液重悬细胞，调整细胞密度至合适范围。

电转参数设置：根据细胞类型和转染核酸类型，设置适宜的电脉冲参数，如电场强度、脉冲时间、脉冲次数等。例如，某些细胞可能需要 1000V/cm 电场强度，20ms 脉冲时间，1 次脉冲。

转染操作：将核酸与细胞悬液混合，转移至电转杯中，进行电穿孔操作。电脉冲在细胞膜上形成电势差，诱导产生暂时的小孔，使核酸进入细胞。

细胞恢复：电转后，将细胞迅速转移至含（血清）细胞培养基的培养器皿中，置于 37℃、5% CO₂培养箱培养，使细胞恢复生长。

2. 检测转染效率

报告基因检测：若使用带有报告基因（如绿色荧光蛋白 GFP）的质粒进行转染，可在转染后 24 - 48 小时，通过荧光显微镜观察报告基因表达情况，统计荧光阳性细胞比例，评估转染效率。

分子生物学检测：采用 qPCR、Western blot 等技术，检测目的基因 mRNA 或蛋白表达水平变化，判断转染后基因的表达情况。例如，通过 qPCR 检测转染前后目的基因 mRNA 表达量，计算相对表达倍数。


ZETA LIFE 解决方案

ZETA LIFE 产品优势

Zeta Life 公司专注于细胞培养产品研发生产，其转染试剂等产品具备显著优势。产品在安全性上表现优秀，生产过程遵循严格标准，最大限度降低对细胞的毒性。生产流程自动化且经过验证，符合 GMP 标准，保障了产品一致性，不同批次间产品质量稳定可靠。在性能方面，针对多种难转染细胞系，如 RAW264.7 细胞，能有效提高转染效率。

• RAW264.7 细胞转染方案

• 质粒 DNA 准备：确保质粒 DNA 浓度为 700ng/ul，溶解于无菌双蒸水或超纯水，且无内毒素。可使用 QIAGEN 试剂盒去除内毒素。

• 细胞接种与转染时机：先将细胞接种到细胞培养板，待细胞汇合度达 70% 左右时进行转染。

• 复合物制备：将质粒 DNA 与 Zeta Life 公司 Advanced DNA RNA 转染试剂（货号 AD600150）按照 1:1（如 12ug:12ul）比例直接混合，用移液器吹吸 10 - 15 次混匀，室温静止 10 - 15 分钟。

• 转染操作：将复合物加入含（血清）细胞培养基的细胞培养板，轻轻混匀，放入培养箱继续培养。不建议将复合物加入无血清培养基。

• 后续培养与检测：转染 24 小时后对细胞正常换液，质粒 DNA 转染 48 小时后通过荧光检测转染效率。

• 其他细胞系转染参考：对于不同细胞系，Zeta Life 产品可依据细胞特性，在核酸与转染试剂比例、细胞接种密度、转染时间等方面进行优化调整。例如，对于某些生长缓慢的原代细胞，可适当降低细胞接种密度，延长转染时间，同时调整核酸与转染试剂比例，以达到最佳转染效果。在进行正式实验前，建议开展预实验，摸索适合特定细胞系的转染条件。