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    探讨免疫细胞转染时要注意的一些基本事项

    发布时间: 2022-09-12  点击次数: 28次
       理想的免疫细胞转染法,应该具有转染效率高、细胞毒性小、重复性好、安全、简单等优点。病毒介导的转染技术,是目前转染效率高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但病毒转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法则各有其特点。
      免疫细胞转染时我们应注意的一些要点如下:
      1.如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或2×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)为宜,在转染前4h换一次新鲜培养液。
      2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其他化学物质的污染,OD260/280比值应在1.8以上。
      3.培养基中的抗生素
      抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率降低。所以,在转染培养基中不能使用抗生素。
      对于稳定转染,不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,因为这些抗生素是选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外,为了保证无血清培养基中细胞的健康生长,使用比含血清培养基更少的抗生素量。
      4.设置阳性对照和阴性对照。
      5.一般在转染24-48h,靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的,24-48h后即可进行靶基因表达的检测实验。
      6.如若建立稳定的细胞系,则可对靶细胞进行筛选,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。
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