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    探讨无血清培养基的一些主要补充因子

    发布时间: 2022-11-07  点击次数: 71次
       无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的全培养基可以满足大部分细胞培养的要求,但对有些实验却不适合,如观察一种生长因子对某种细胞的作用,这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子;又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质(抗体、生长因子)的能力;或者要大规模的培养某种细胞,以获得它们的分泌产物。因此研制出无血清培养基一直是生物科学工作者努力的目标。
      补充因子是代替血清的各种因子的总称。多数无血清培养液必须补加3-8种因子。胰岛素和转铁蛋白是必须补充因子,其他多数为辅助作用的因子。按其功能不同,补充因子可分为以下五类:
      1.激素和生长因子
      很多细胞用无血清培养时需要加⼊激素,如胰岛素、生长激素、胰⾼糖素等。胰岛素是重要的细胞存活因子,与细胞上的胰岛素受体结合后可促进RNA、蛋白质和脂肪酸的合成,抑制细胞凋亡。此外,雌⼆醇、孕酮等也是无血清培养基中常添加的补充因子。
      2.结合蛋白
      常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。转铁蛋白与细胞上的转铁蛋白受体结合是细胞获取铁元素的主要来源。白蛋白与脂类、激素、维生素、⾦属离子和生长因子结合后可调节上述物质在无血清培养基中活性的作用,此外,由于牛血清白蛋白⼀般添加量比较大,可增加培养基的粘度,保护细胞免受机械损伤。
      3.贴壁因子
      许多细胞必须贴壁才能生长,这种情况下无血清培养基中⼀定要添加促贴壁和扩展因子,⼀般为细胞外基质,如纤粘连蛋白、胶原蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子,对许多细胞的繁殖和分化,起着重要作用。纤粘连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化,这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞、CHO细胞等。
      4.酶抑制剂
      培养贴壁生长的细胞,需要用胰酶消化传代,在无血清培养基中不可少须含酶抑制剂,以终止酶的消化作用,达到保护细胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制剂。
      5.其他补充因子
      ⼀些细胞培养使用的无血清培养基还需要补充微量元素、维生素、脂类等低分子量物质。
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