销售热线

19126518388
  • 技术文章ARTICLE

    您当前的位置:首页 > 技术文章 > 为什么不能用质粒DNA抽提试剂来提取基因组DNA?

    为什么不能用质粒DNA抽提试剂来提取基因组DNA?

    发布时间: 2021-08-24  点击次数: 538次

    导读

        为什么同样抽提质粒DNA的试剂不能用来抽提基因组DNA呢?差别很大么?要买两种试剂盒真是麻烦啊!你还不要不相信,有小伙伴试过,还真没抽提出来。今天小编就来和大家一起探究下原因!


    基因组DNA的抽提,一般不会用到质粒抽提的试剂盒,究其原因是由于两者的原理完全不同。两者不都是DNA抽提么?其实关键在于这两者在实验的初始设计上就完全不同。先给大家解释一下质粒抽提吧。


    质粒抽提

    质粒抽提通常用的是碱裂解法,一般的试剂盒都会有 SolutionⅠ,SolutionⅡ,SolutionⅢ,有的还会有 SolutionⅣ,然后是过柱子。


    SolutionⅠ

        SolutionⅠ一般都是用来重悬菌液的,会加入RNaseⅠ,降解掉里面大肠杆菌的RNA。同时里面还会用Tris-HEI体系来维持一个pH,另外会加入较大量的EDTA,去螯合掉里面二价金属离子,使菌体本身的DNase失活。其实用双蒸水来代替SolutionⅠ问题也不大,关键就是把菌重悬起来就行。


    Solution Ⅱ

        Solution Ⅱ,一般来说主要成分有两个,就是NaOH和SDS,NaOH主要是用于破坏细胞膜结构,强碱条件下,菌体的细胞壁结构、细胞的磷脂双分子层和微囊结构的构相都会发生变化。而SDS在这里主要并不是起到裂解蛋白的作用,而是结合氨基酸,一般两个氨基酸可以结合一个SDS分子。菌体裂解后,其实小片段的质粒已经释放出来了,而大片段的基因组DNA还结合在蛋白质上。


    Solution Ⅲ

        Solution Ⅲ的主要成分是醋酸钾/醋酸缓冲液。首先长时间强碱环境下,DNA会断裂,所以需要用醋酸进行中和,而钾离子可以与SDS产生沉淀反应,使可溶于水的十二烷基磺酸钠变成不溶于水的十二烷基磺酸钾。这样结合蛋白质的PDS就被沉淀下来了,同样基因组DNA也同样被沉淀了下来,用硅胶吸附释放在上清里的质粒,或者用无水乙醇对上清进行沉淀,即可获得质粒的DNA。


    基因组DNA抽提

    而普通的基因组 DNA 抽提,首先是裂解,用离子型的蛋白变性剂:CTAB 或者 SDS 对细胞进行裂解(加不加蛋白酶 K 其实并不太要紧),破膜的同时使得 DNA 从蛋白上解离下来。 加入高盐溶液使蛋白质沉淀。然后用酚仿,使蛋白质沉淀变性在水相油相间,并分离出的可溶性蛋白。上清用异丙醇将 DNA 沉淀下来,同时低温加入一定量的一价阳离子,可加速 DNA 沉淀。这些能和上述的质粒抽提混为一谈么?!当然不行啊! 


    小伙伴们现在能明白为啥基因组 DNA 不能用质粒抽提的试剂了吧……




在线咨询
咨询热线

0759-5588931

[关闭]