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    上图!教你秒懂重组 DNA 技术常用工具酶!

    发布时间: 2021-08-25  点击次数: 3050次

    1 分子剪刀——限制性内切酶: 

    作用:识别特异序列,切割 DNA


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    限制酶的命名是根据细菌种类而定,以 EcoRI 为例:


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    2 胶水——DNA 连接酶 

    作用:跟限制性内切酶对着干,催化 DNA 中相邻核苷酸间形成磷酸二酯键,使 DNA 切口缝合,连接 DNA 片段。 

    无论是双股或是单股 DNA 的黏合,DNA黏合酶都可以借由形成磷酸双脂键将 DNA 在 3'端的尾端与 5'端的前端连在一起。


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    3 DNA 聚合酶 

    就像玩拼图能手,DNA 聚合酶用于 DNA 复制,连接两条 DNA 单链形成一条 DNA 双链,作用于碱基对间的氢键。 

    DNA 聚合酶主要应用于: a.合成双链 cDNA 中第二条链;b.缺口平移制做探针;c.DNA 序列分析;d.填补 3'末端。


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    4 反转录酶 

    作用:a.合成 cDNA;b.替代 DNA 聚合酶Ⅰ进行填补,标记或 DNA 序列分析 

    反转录酶的基本特性:以 RNA 为模板聚合 cDNA 链以及双向外切 DNA-RNA 杂合链中的 RNA 链。 

    主要用于荧光定量 PCR 和 cDNA 文库构建等。


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    5 多聚核苷酸激酶 

    作用:催化 DNA 5'羟基末端磷酸化,或标记探针

    它是由 T 偶数噬菌体所感染的大肠杆菌分离出来的酶,能催化 ATP 的 γ-磷酸转移到 DNA 或 RNA 的 5'-OH 末端生成 ADP 的反应。 

    因为此酶的催化反应特异性很高,可用 32P 标记的 ATP 特异地标记多核苷酸的 5'末端。广泛应用于多核苷酸的链长的测定和 5'末端核苷酸排列的确定等核酸结构的研究。


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    6 碱性磷酸酶:切除 DNA5′末端磷酸基 

    碱性磷酸酯酶的作用是从 DNA 或 RNA 的三磷酸核苷酸上除去 5'磷酸根残基。可用于防止 DNA 片段自身连接,或标记(5'端)前除 DNA 或 RNA 5' 磷酸。


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    7 末端转移酶:在 3'羟基末端进行同系多聚核苷酸加尾。 

    末端转移酶的作用是将脱氧核糖核苷酸通过磷酸二酯键加到 DNA 分子的 3'-OH 末端。主要用于拼接人工接头或在 3'端进行引物标记的时候。


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    8 DNA 水解酶 

    DNA 在水解酶的作用下,可以得到四种不同的核苷酸,即腺嘌呤脱氧核苷酸【A】,鸟嘌呤脱氧核苷酸【G】,胞嘧啶脱氧核苷酸【C】,胸腺嘧啶脱氧核苷酸【T】。


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    9 RNA 酶:切割 RNA 

    一类催化 RNA 降解为小片段的核酸酶。 

    RNase 酶非常稳定,是导致 RNA 降解最主要的物质。


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