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    【DNA 电泳】教你做果冻:琼脂糖凝胶电泳实验技巧分享

    发布时间: 2021-08-26  点击次数: 2074次

    果冻晶莹剔透,口感 QQ 的,其实果冻的原料琼脂糖,也是我们平时用来跑电泳的材料,琼脂糖凝胶电泳实验常用以 DNA 切胶回收,DNA 分离和用于佐证 DNA 是否重组、质粒等是否切开。今天我们就来聊聊琼脂糖凝胶电泳实验的一些小技巧小细节。


    【DNA 电泳】教你做果冻:琼脂糖凝胶电泳实验技巧分享


    第一步:胶液的制备 

    称取 0.4g 琼脂糖,置于 200ml 锥形瓶中,加入 50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液,放入微波炉里加热,直到琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为 0.8%琼脂糖凝胶液。总液体量不宜超过锥瓶的 50%容量。否则会溢出来的。还要擦洗微波炉。加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发。


    第二步:胶板的制备 

    倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀。东一块西一块的。果冻做出来就不好看啦。速度也不可太快,否则容易出现气泡。果冻做出来里面都是气泡。怎么吃呀?待胶完全凝固后拨出梳子,注意不要损伤梳底部的凝胶。


    第三步:加样 

    注意上样时要小心操作,避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。果冻下面被戳个窟窿,还怎么吃呀?


    第四步:电泳 

    加完样后,合上电泳槽盖,立即接通电源。控制电压保持在 60-80V,电流在 40mA 以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约 2cm 时,停止电泳。

    【DNA 电泳】教你做果冻:琼脂糖凝胶电泳实验技巧分享


    第五步:染色 

    未加 EB 的胶板在电泳完毕后移入 0.5μg/ml 的 EB 溶液中,室温下染色 20-25 分钟。


    第六步:观察和拍照 

    在波长为 254nm 的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有 EB 的电泳胶板。DNA 存在处显示 出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩,以免损伤眼睛。


    除这些细节之外,还有一些注意事项: 

    1、酶切时所加的 DNA 溶液体积不能太大,否则 DNA 溶液中其他成分会干扰酶反应。 

    2、酶活力通常用酶单位(U)表示,酶单位的定义是:在最适反应条件下,1 小时完全降解 1 mg λDNA 的酶量为一个单位,但是许多实验制备的 DNA 不象 λDNA 那样易于降解,需适当增加酶的使用量。反应液中加入过量的酶是不合适的,除考虑成本外,酶液中的微量杂质 可能干扰随后的反应。 

    3、市场销售的酶一般浓度很大,为了省着点儿花,使用时可事先用酶反应缓冲液进行稀释。 另外,酶通常保存在 50%的甘油中,实验中,应将反应液中甘油浓度控制在 10%以下,否则,酶活性将受影响。 

    4、观察 DNA 离不开紫外透射仪,可是紫外光对 DNA 分子有切割作用。从胶上回收 DNA 时, 应尽量缩短光照时间并采用长波长紫外灯(300-360nm),以减少紫外光切割 DNA。

    5、EB 是强诱变剂,还有中等毒性,就是有致癌性。配制和使用时都要戴好手套。尽量不要把 EB 洒到桌面或地面上。如果真的不幸洒到桌面或地面上了,凡是沾污了 EB 的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃。

    6、当 EB 放太多了,胶染色过深,DNA 带看不清的时候,可将胶放入蒸馏水冲泡,30 分钟后再观察。 


    以上,安培君介绍了做果冻,啊,不!做琼脂糖凝胶电泳实验的一些小技巧小窍门,也希望大家伙儿做出好吃的“果冻"来。



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