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    Get到这几招,方可轻松搞定SDS-PAGE电泳实验!

    发布时间: 2021-09-03  点击次数: 296次

    SDS-PAGE 作为一个老生常谈的实验,早已广为科研者所知。然而该实验虽然基础,但是细节繁琐,耗时长久,光是配制试剂就要花费 2 个小时左右。而这还只是 Western blot(WB)的第一步,也使得完成 WB 实验将会耗费 2 天左右的时间。 这也难怪科研者们常说,一入 WB 深似海,从此休闲是路人。不过,实践出真知,长期在该实验里跌爬滚打也总结出了若干小技巧,可使大家轻松快捷的完成该实验。


    1、未雨绸缪,做好万全准备 

    常言道,不打无准备之仗,方能立于不败之地。实验中种种试剂、抗体等等均是完成实验这座大厦的基石,如果基石打不牢,实验很有可能会半路夭折。而实验中最痛苦的莫过于与实验结果就差那么一步之遥。

    以 Western blot(WB)为例,这眼瞅着就要到条带现身的奇迹时刻,却愣是让曝光试剂的匮乏给硬生生的截断了见证过程,又怎会不让人懊恼上火呢? 

    其实,上述窘境皆是科研者在实验前准备不足所致,若是能提前发现试剂的不足,或对试剂重新订购,又或者重新配制溶液,均能再次推进实验进程。然而就这订购或配制试剂的过程无疑会消耗我们的时间以及精力。 

    那么为了避免原材料浪费以及节省更多的时间,SDS-PAGE 电泳过程中的一些试剂还是早早的配制并妥善保存起来为好,如此方可以备不时之需。

    缓冲液(buffer): 

    关于这一点,你可能早已知晓,但再次重复一遍也不是坏事。实验中可将所有的凝胶缓冲液进行一次性大量配制,如此可方便后续实验中对其的任意使用。至于配制的浓度,10x 浓度是实验室配制母液常用的浓度。有些实验室会多次重复利用这些凝胶电泳缓冲液,在这种情况下,建议每次使用 buffer 时均要在缓冲瓶上贴一个标签,已记录使用的次数,超过一定期限后就要对缓冲液进行重新配制,以免对实验结果造成影响。

    过硫酸铵(APS): 

    在接触 SDS-PAGE 电泳之初,每次配胶时均会制备新鲜的 APS,可后来发现溶解后的 APS 在分装后,可在-20℃冰箱中得以长期储存。另外,如果你需要经常使用 SDS-PAGE 凝胶,那么可取出一只分装后的 APS 溶液,将其置于 4℃冰箱里,可保证其一个月不会过期。

    凝胶(gel): 

    凝胶是现用现配的好,已成为了各位心中的常识,那么是不是就意味着凝胶不能提前制备么?其实不然,提前准备好的凝胶在 4℃冰箱中大致可以保持两周左右。但需要谨记的是在储存凝胶时,保持凝胶湿润是非常重要。可以将凝胶板、梳子甚至整个固定装置都装入一个充满蒸馏水的塑料盒中,而后再将其放在 4℃冰箱中进行保存。

    样品(sample):

    大家都知道,制备好的蛋白样品要放在-20℃冰箱中进行存储,有时一些稀少珍贵的样品甚至还要放在-80℃冰箱里保存。在此,建议在储存近期就要进行 PAGE 电泳的蛋白样品时,可将该蛋白样品与 loading  buffer 混合在一起,加热变性之后再进行储存。如此就可以在上样前,将蛋白样品解冻并离心即可。用该法储存样品长达一年的时间,且实验结果依然没有被破坏。


    2、改变分离胶的覆盖液体 

    通常多数人在制备好分离胶后,会用蒸馏水覆盖其上,以避免分离胶的高低不平。但是实际上,此时用异丙醇代替水的效果会更好,因为异丙醇可以更好保护凝胶,并使凝胶更快地发生聚合,进而节省制胶的时间。


    3、缓冲液不够用?准备些弹珠吧 

    有时,实验过程中,你会忽然发现没有足够的电泳缓冲液,此时一个节省时间的方法就是在现有电泳缓冲液添加一些弹珠(是的,就是我们小时候曾经玩过的),以提高缓冲液的高度水平来保证缓冲液能没过上样孔。 但是要确保这些弹珠是洁净的,否则一旦其对上样的蛋白样品造成了污染,就不要妄想此次实验会得到一张漂亮的实验结果图片了。


    4、传输缓冲区 

    每个做 SDS-PAGE 电泳的童鞋,只怕都担心过内腔中的电泳缓冲液会有所泄露,毕竟当缓冲液水平降低过多,以至于不能达到覆盖加样孔时,就会导致孔内变得干燥,进而使得凝胶电泳变得无法正常运行。也许,有人会建议你,当你发现缓冲液下降的太过厉害,则需要暂停电泳,打开电泳槽,重新给内腔添加电泳液,而后再次开启电泳过程。可能电泳期间你会多次重复该过程直至实验完成为止。

    显然,该方法需要大家时刻关注电泳槽内腔类电泳液的高低水平变化,其实也是蛮费时费力的。而有个简单粗暴的做法,即一次性在内腔外部也添加同水平的电泳液,如此便可以一劳永逸的解决内腔电泳液泄露问题。


    参考文献:SDS-PAGE Tips and Tricks to Save You Time

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