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    WB电泳技巧分享

    发布时间: 2021-09-14  点击次数: 1222次

    ① 清洗玻璃板,去离子水冲,风干或烤干(一定要以处女座的精神去严格要求自己把板子洗干净,相当重要) 

    ② 按说明书配胶。先配下胶(分离胶),一般两块板配 10ml 的 10%的胶(20~80kDa 通用)胶的浓度根据你所需要跑的蛋白的分子量大小决定,混匀后灌胶,立即用正丁醇或无水乙醇封,待凝固后倒出正丁醇,用去离子水冲洗,滤纸吸干;③ 配上胶(积层胶),参考说明书,一般两块板配 4ml 的 5%的胶,混匀后灌胶,插板,待凝固。(可 4°过夜) 

    ④ 配电泳液(tris3.03g,甘氨酸 14.4g,SDS1g,定容至 1L) 

    ⑤ 将玻璃板装好放入电泳槽中,加电泳液,轻轻拔梳。 

    ⑥ 上样(这是每个WB达人最能装逼的一个环节,高手会告诉你凭感觉加样连孔都不用看) 

    ⑦ 连接电源,一定要注意红对红,黑对黑,定电压和时间,上胶(90v,约 40min,maker 分出条带),换压,下胶(120v,2h)。(不要让溴酚蓝跑出去)


    经验总结:

    想要条带跑的好看点,最好把上胶稍微配高一点。

    换电压主要是看溴酚蓝有没有跑到下胶,没有确定的时间点。

    胶最好现配现用,如果需要保存最好用湿润的保鲜膜包好。


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